10751.兔糞樣大豆異黃酮轉(zhuǎn)化菌株的分離鑒定及轉(zhuǎn)化特性研究

1、分類號：Q窆3窆：窆窆密級：公玨單位代碼：學(xué)號：100862011083兔糞樣大豆異黃酮轉(zhuǎn)化菌株的分離鑒定及轉(zhuǎn)化特性研究Isolation，identificationandbiotransformingpropertyofisoflavonebiotransfc‘bacteriaisolatedfromrabbitisotlavonebiotranslormin2DacterlaISolateIromraDDItfeces學(xué)位申請人：

2、周博指導(dǎo)教師：王秀伶教授學(xué)科專業(yè)：微生物與生化藥學(xué)學(xué)位類別：理學(xué)碩士授予單位：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)答辯日期：二。一四年六月二日摘要大豆異黃酮是大豆等蝶形花亞科植物產(chǎn)生的黃酮類次級代謝產(chǎn)物，主要分布于大豆、苜蓿等極少數(shù)植物中。迄今已知的大豆異黃酮共有12種異構(gòu)體，其中包括3種苷原形式，即黃豆苷原(daidzein)、染料木素(genistein)和黃豆黃素(glycitein)，另外9種以葡萄糖苷形式存在。體內(nèi)試驗表明，哺乳動物攝入體內(nèi)的大豆異黃

3、酮糖苷被腸道微生物菌群產(chǎn)生的葡萄糖苷酶水解為苷原，或被機體直接吸收，或在腸道微生物菌群作用下被降解為二氫黃豆苷原(dihydrodaidzein，簡稱DHD)、雌馬酚(equ01)、去氧甲基安哥拉紫檀素(Odesmethylangolensin，簡稱ODma)、二氫染料木素(dihydrogenistein，簡稱DHG)和5一羥基一雌馬酚(5hydroxyequ01)等不同代謝產(chǎn)物。本研究首次從兔糞樣菌群中分離得到2株對大豆異黃酮有轉(zhuǎn)化

4、功能的細(xì)菌菌株，我們將其分別命名為菌株AUHJLR41(Ⅺ188150)和菌株AUHJLR23(KJl88151)。經(jīng)BLAST比對，發(fā)現(xiàn)菌株AUHJLR41的16SrDNA序列與斯奈克氏菌屬菌株SlackiaequolifaciensDZE(EU377663)的相似性最高，相似性為996％：菌株AUHJLR23與梭菌屬菌株ClostridiumspTM40(AB249652)相似性最高，相似性為9712％。結(jié)合菌體形態(tài)和革蘭氏染色等，

5、將菌株AUHJLR41鑒定為斯奈克氏菌屬菌株，即SlackiaspAUHJLR41，將菌株AUH—JLR23鑒定為梭菌屬菌株，且PCIostridiumspAUHJLR23。通過高效液相色譜檢測發(fā)現(xiàn)，菌株AUHJLR41和菌株AUHJLR23代謝底物黃豆苷原和染料木素后生成的產(chǎn)物的HPLC保留時間和紫外吸收圖譜與DHD和DHG標(biāo)準(zhǔn)品完全相同。因而，將菌株AUHJLR41和菌株AUHJLR23代謝底物黃豆苷原和染料木素后生成的產(chǎn)物鑒定為D

6、HD和DHG。通過質(zhì)譜分析(ESIMS)發(fā)現(xiàn)，菌株AUHJLR41代謝底物黃豆苷原后生成的產(chǎn)物的分子量為256，這與DHD的分子量相吻合；菌株AUHJLR41代謝底物染料木素后生成的產(chǎn)物的分子量為272，這與DHG的分子量相吻合。通過手性柱分析發(fā)現(xiàn)，菌株AUHJLR41和菌株AUHJLR23代謝底物黃豆苷原和染料木素后生成的產(chǎn)物的對映體過量率均為0％ee。此外，對菌株AUHJLR41和菌株AUHJLR23的轉(zhuǎn)化動態(tài)和轉(zhuǎn)化能力進(jìn)行了測定。