水稻OsGF14-c基因功能的初步分析.pdf

1、GF14是一類在高等植物的基本代謝、信號轉(zhuǎn)導、抗逆以及轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)等多種生理生化途徑中發(fā)揮重要作用的基因。這類基因是14-3-3基因家族的成員，由于啟動子結(jié)構(gòu)中具有一個保守的G-Box元件而得名。我們根據(jù)該類基因的保守序列合成特異性探針，從水稻中花10號花的cDNA文庫中篩選到一個基因，通過全長測序以及同源比較，發(fā)現(xiàn)它的核酸序列與NCBI數(shù)據(jù)庫中注冊的水稻GF14-c基因有高達99％的同源性，并在其上游啟動子區(qū)也發(fā)現(xiàn)了一個保守的G-Box元

2、件，從而確定該基因是水稻的GF14-c基因，我們把它命名為OsGF14-c。OsGF14-c的cDNA全長1154bp，編碼256個氨基酸。序列分析表明該基因與酵母同源基因BMH2有71％的同源性，構(gòu)建真核表達載體pdYES2，借助LiAC轉(zhuǎn)化法將pdYES2導入BMH2缺陷型酵母菌株GG3000，篩選獲得了補償BMH2功能的重組酵母菌株P(guān)YGG。OsGF14-c基因的啟動子區(qū)域具有一個典型的、高等植物特有的順式作用元件G-Box元件，

3、提示該基因可能與轉(zhuǎn)錄因子相互作用，洋蔥表皮瞬時表達實驗驗證了OsGF14-c是核定位的。構(gòu)建原核表達載體pGF-c2轉(zhuǎn)化大腸桿菌XL1-Blue，篩選獲得了表達GF14c-MBP融合蛋白的重組菌株，利用直鏈淀粉親和層析純化了OsGF14c-MBP融合蛋白。為了研究該基因在水稻的生長發(fā)育過程中所起的作用，我們以OsGF14-c基因的全長cDNA序列構(gòu)建反義表達載體載體p35sCAMVF，并分別以OsGF14-c cDNA序列的特異區(qū)段以及