苦物質(zhì)對氣管平滑肌的影響及其信號通路的研究.pdf

1、味覺是哺乳動物極為重要的感覺,其中苦味是五大基本味覺之一。苦物質(zhì)受體近期被廣泛發(fā)現(xiàn)于身體的各個組織細胞中,如:胃腸道細胞,睪丸細胞,神經(jīng)細胞和呼吸細胞。近期的研究表明苦物質(zhì)受體參與了氣管平滑肌細胞的舒張作用,其過程是在給氣管平滑肌細胞激動劑如乙酰膽堿,引起氣管收縮之后,再加入苦物質(zhì)如chloroquine,能夠使氣管平滑肌細胞舒張。但是在氣管平滑肌細胞靜息狀態(tài)下,單純加入苦物質(zhì)卻引起了氣管平滑肌細胞的鈣離子的升高。這看似矛盾的作用使得苦

2、物質(zhì)作用于氣管平滑肌細胞的機理急待闡明。
　　本文一方面研究的是通過測量氣管肌張力的方法,給完預刺激之后,在給激動劑乙酰膽堿的時候再給苦物質(zhì)chloroquine能引起氣管的舒張;并且用激光共聚焦雙記錄的方式,我們把鈣離子用特異性的染料FLUO-4染色,通過透射光和激光的雙記錄,我們看到細胞收縮的同時,chloroquine能降低細胞的鈣離子,我們認為這是引起氣管舒張的主要原因。
　　另一方面研究的是苦物質(zhì)chloroqui

3、ne在靜息狀態(tài)下能否引起氣管平滑肌細胞的收縮,并闡明其機理。通過氣管環(huán)肌張力測量的方法,在給完3次乙酰膽堿預刺激之后,靜置30分鐘使氣管恢復,觀察氣管在靜息狀態(tài)下加入chloroquine時,能引起氣管平滑肌的一過性的收縮,為了證明引起收縮作用的鈣離子是來源于細胞外的鈣離子進入,還是細胞鈣庫中的鈣離子釋放入胞漿,我們先用無鈣離子的細胞外液進行相同的實驗,chloroquine依然能引起收縮。為了進一步驗證,我們用鈣泵阻斷劑CPA使細胞內(nèi)

4、鈣排空后再加入chloroquine,則收縮作用被阻斷。這兩方面同時印證了chloroquine引起氣管平滑肌收縮的機理是使細胞內(nèi)鈣釋放進入胞漿,胞漿鈣離子濃度升高引起了收縮。
　　苦物質(zhì)引起的收縮是一過性的,其模式很像內(nèi)鈣釋放所引起的,我們就觀察chloroquine對IP3受體的影響,用IP3受體阻斷劑2-APB阻斷后,加chloroquine后氣管平滑肌無收縮,則chloroquine作用于IP3受體使內(nèi)鈣釋放的,其上游通路

5、GProtein-PLC可能發(fā)揮了作用,通過特異性的Gα阻斷劑PTX培養(yǎng)氣管環(huán)過夜,再加入chloroquine時,其收縮作用被抑制,同樣的實驗用Gβγ阻斷劑Gallein則對收縮沒有抑制作用。這些數(shù)據(jù)說明了chloroquine通過Gα-PLC-IP3-IP3R通路引起細胞內(nèi)鈣的釋放,導致了這個一過性的收縮。
　　我們研究發(fā)現(xiàn),苦物質(zhì)通過苦受體,引起了鼠氣管平滑肌收縮,并非舒張,本研究結(jié)果對進一步探討苦物質(zhì)和苦受體在哮喘氣道高反