細(xì)菌磁小體免疫熒光檢測果樹病毒的快速高靈敏度檢測體系建立.pdf

1、本文以羊抗兔抗體為例，進(jìn)行了抗體連接到BMPs影響因子研究，并建立了以BMPs為抗體載體的熒光檢測抗原的體系；應(yīng)用所建立的檢測體系對果樹病毒-葡萄扇葉病毒(GFLV)和李屬壞死環(huán)斑病毒(PNRSV)進(jìn)行了檢測；并與ELISA檢測方法作了對比研究?！　⊙芯勘砻鳎河绊懣贵w連接到BMPs上的因子是多方面的，并且抗體的連接效率與檢測靈敏度有關(guān)；應(yīng)用BMPs的熒光檢測方法比ELISA方法靈敏105～106倍?！　∮蓪?shí)驗(yàn)結(jié)果得知，許多緩沖液可以

2、作為羊抗兔抗體連接到BMPs反應(yīng)體系的緩沖液，從實(shí)驗(yàn)所采用的12種常用緩沖液，在通常所使用的濃度與pH值條件下對LRA的影響研究得知，LRA變化范圍為35～95μg/mg。進(jìn)一步對兩種有機(jī)緩沖液(Tris-Cl，HEPES)和一種無機(jī)緩沖液(Na3PO4)的pH值和濃度研究表明，不同的緩沖液使LRA達(dá)到最高時的pH值和溶液濃度不同。由此得知，偏酸的環(huán)境有利于抗體連接到BMPs，而且有機(jī)溶液的濃度較無機(jī)的高。溫度對LRA也有影響，不同的連

3、接溫度使LRA達(dá)到最高的時間不同。在1ml的反應(yīng)體系中抗體用量越多，BMPs用量越少，獲得的LRA越高。并且BMPs的質(zhì)量與LRA有關(guān)，高質(zhì)量的BMPs可以獲得高的LRA。冷凍干燥BMPs對抗體連接效率有影響，使LRA降低；并且冷凍干燥前預(yù)處理方式使LRA有異。超聲波清洗器懸浮和搖床晃動有利于抗體的連接，縮短LRA達(dá)到最大值的時間?！　】贵w的連接效率與抗原檢測的靈敏度有很大的關(guān)系，連接效率越高，抗原檢測的靈敏度也越高。以BMPs為抗體