基于快速分離、高靈敏度檢測的毛細管電泳優(yōu)化方法研究與應用.pdf

1、毛細管電泳技術(shù)以其高效、快速、微量、經(jīng)濟、應用面廣等優(yōu)點,受到了世界范圍的廣泛重視,在化學、藥學和生命科學等領域均得到了廣泛深入的發(fā)展。本文旨在構(gòu)建“快速、高靈敏度、高通量”的分析策略,建立基于快速分離、高靈敏度檢測的毛細管電泳優(yōu)化方法,并將其應用到藥物質(zhì)量控制和新藥的藥代動力學研究中。全文由四章組成。 第一章是概述。分別介紹了毛細管電泳的發(fā)展現(xiàn)狀和發(fā)展熱點,并在此基礎上提出本文的立題依據(jù)和研究內(nèi)容。 第二章是以右旋苯丙

2、胺和苯海拉明為研究對象,建立了快速毛細管區(qū)帶電泳方法用于速效抗暈膠囊的質(zhì)量控制。分別對內(nèi)標選擇、進樣模式、pH、緩沖液組成及濃度和分離電壓等影響因素作了系統(tǒng)的研究。使用未涂布熔融石英毛細管柱40.2 cm×75μm i.d.,有效長度30 cm,運行緩沖液為50 mmol/L NaH2PO4-12.5mmol/L硼砂緩沖液(pH 5.5),柱溫為25℃,運行電壓為20 kV(+)→(-),電遷移進樣10 kV×4s,檢測波長為200 n

3、m。右旋苯丙胺、苯海拉明和內(nèi)標氨氯地平的遷移時間分別為1.45、1.56和1.67 min,每個樣品分析周期為2.0 min。與常規(guī)高效液相色譜質(zhì)量控制方法相比,分析時間至少縮短了3 min,提高了樣品分析的速度。 第三章是以右旋苯丙胺和苯海拉明為對象,利用場放大技術(shù),建立高靈敏度的毛細管區(qū)帶電泳方法應用于速效抗暈膠囊的臨床前藥代動力學研究。通過考察樣品溶劑的組成、緩沖液的濃度、緩沖液的組成和進樣時間等因素的改變對于場放大結(jié)果的

4、影響,確定了Beagle犬血漿中右旋苯丙胺和苯海拉明的CZE-FASS條件。在3.5 min內(nèi)完成分離分析,生物樣品內(nèi)源性物質(zhì)不干擾目標成分的測定。右旋苯丙胺、苯海拉明和內(nèi)標氨氯地平在血漿樣品中的富集倍數(shù)為48、67和43倍。與文獻報道LC/MS/MS方法進行比較,結(jié)果表明CZE-FASS方法的LLOQ(右旋苯丙胺和苯海拉明均為2 ng/mL)雖略高于LC/MS/MS方法(右旋苯丙胺0.5 ng/mL,苯海拉明1 ng/mL),但已完全

5、滿足體內(nèi)樣品測定的要求,其他參數(shù)均與LC/MS/MS方法相當。對于一般采用串聯(lián)質(zhì)譜檢測才能夠獲得的快速分析,采用CZE-FASS方法同樣可以實現(xiàn)生物樣品的高靈敏度快速分析,成為一種低廉、環(huán)保、有效的替代方法,已成功應用于速效抗暈膠囊的臨床前藥代動力學研究。 第四章是以普盧利沙星代謝產(chǎn)物NM394為研究對象,建立了高通量96孔固相萃取-毛細管區(qū)帶電泳方法對普盧利沙星進行臨床藥代動力學研究。由于樣品前處理成為體內(nèi)藥物分析方法中最大的

6、限速環(huán)節(jié),故對前處理進行了方法學的改進和優(yōu)化,采用96孔板模式對生物樣品進行純化,提高了單位時間內(nèi)樣品的通量,實現(xiàn)了大規(guī)模樣品前處理和毛細管電泳快速分離的高通量分析。建立的96孔板固相萃取-毛細管電泳測定人血漿中NM394的方法,與現(xiàn)有的方法相比,提高了樣品前處理通量,縮短了分析周期。用非房室模型法估算相應的藥代動力學參數(shù),與高效液相色譜-熒光檢測法所得參數(shù)相比較,兩者無顯著性差異。結(jié)果證明了毛細管區(qū)帶電泳對血漿中普盧利沙星活性代謝物N