重組纖維連接蛋白氨基端肝素結(jié)合域多肽的制備和在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)研究.pdf

1、纖維連接蛋白(Fibronectin，F(xiàn)N)是一種多功能的糖蛋白，能與肝素、膠原、纖維蛋白以及整合素家族的細胞表面受體結(jié)合，參與細胞的黏附、遷移、止血、抗感染以及維持血管的完整性等多種作用。FN分子中有多個功能結(jié)構(gòu)域，其中的兩個肝素結(jié)合域，分別位于其N端和C端。已有的研究表明FN的肝素結(jié)合域多肽具有以下多種功能：增強血管內(nèi)皮生長因子的活性，促進血管的生成[1]；增強細胞結(jié)合域介導(dǎo)的細胞黏附與增殖，抑制肝癌的生長和轉(zhuǎn)移[2-4]；通過抑制

2、p53和c-Myc基因調(diào)節(jié)細胞的凋亡，同時參與調(diào)節(jié)造血干細胞的增殖與分化，并能與淋巴細胞表面的CD44結(jié)合，參與免疫的調(diào)節(jié)[5-7]；具有刺激組織纖溶酶原激活和激活纖溶酶的活性[8]。本課題組的鄒起練博士、吳勇博士等前期成功構(gòu)建了FN N端肝素結(jié)合域多肽的酵母表達載體，并成功轉(zhuǎn)化GS115酵母菌株，用酵母表達出了FN N端肝素結(jié)合域多肽(FNNHBDPP)，且通過動物實驗表明FNNHBDPP具有治療小鼠敗血癥和彌漫性血管內(nèi)凝血(DCI)

3、的作用。實驗研究還發(fā)現(xiàn)FNNHBDPP可以抑制黑色素瘤及肝癌的侵襲和轉(zhuǎn)移，可見FNNHBDPP在治療敗血癥、DIC和腫瘤方面具有巨大的潛力。但是FNNHBDPP在動物體內(nèi)的代謝模式、組織分布、排泄方式等都還不清楚，有待進一步深入研究。 本實驗在前期研究的基礎(chǔ)上，用發(fā)酵罐自動表達和純化出FNNHBDPP，并利用125I-FNNHBDPP作為示蹤劑，采用同位素示蹤-高效液相色譜法(HPLC-RAD)研究了FNNHBDPP在大鼠體內(nèi)的

4、藥代動力學(xué)過程，考察了該藥在大鼠體內(nèi)的代謝、排泄情況和在小鼠體內(nèi)的組織分布情況，為新藥臨床前藥效和藥理學(xué)實驗提供了重要的藥動學(xué)信息。實驗結(jié)果表明：1采用全自動發(fā)酵罐表達的FNNHBDPP，表達量高，純化以后經(jīng)過電泳純度和色譜純鑒定，F(xiàn)NNHBDPP純度可達98％以上；2靜注FNNHBDPP后在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)模型符合二房室模型，大鼠高、中、低劑量的體內(nèi)平均分布半衰期T1/2α分別為：6.28±0.29min、6.23±0.33min

5、、5.55±0.34min，平均消除半衰期T1/2β分別為：94.37±4.49min、89.49±4.04min、82.22±2.86min，AUC與劑量的線性相關(guān)性為99.3％。144h內(nèi)約有74％的代謝物從尿排出，同時約有6.3％的代謝物從糞便中排出，72h內(nèi)約有6.5％代謝物從膽汁排出，說明125I-FNNHBDPP代謝物主要通過腎臟排泄。125I-FNNHBDPP在小鼠各組織中隨時間的動態(tài)分布狀況，5min時放射活性在各臟器的