HSP90調(diào)控蛋白HBP21在人視網(wǎng)膜色素上皮細胞中的表達.pdf

1、目的：研究熱休克蛋白HSP90以及HBP21在ARPE19細胞中的表達及二者之間的相互作用，并進一步探討了HSP90與HBP21相互作用的位點。 方法：首先，通過RT-PCR研究生理狀態(tài)下二者在ARPE19細胞中的表達。然后構(gòu)建PGBKT7-HBP21的誘餌基因，進行酵母雙雜交發(fā)現(xiàn)HSP90與HBP21之間存在相互作用，再誘導(dǎo)6His-HSP90蛋白以及GST-HBP21融合蛋白，通過GST Pull-Down進一步驗證三者之間

2、的相互作用。此外還通過構(gòu)建不同片段的HSP90及HBP21載體進行實驗，研究其具體作用位點。 結(jié)果：生理狀態(tài)下，在人的RPE細胞中兩者都有一定水平的表達。通過酵母雙雜交和GST Pull-Down證實HSP90與HBP21可以相互作用，不同片段的HSP90與HBP21的相互作用表明HBP21通過其三聯(lián)TPR結(jié)構(gòu)域與HSP90的C端結(jié)構(gòu)域發(fā)生相互作用。 結(jié)論：HSP90是熱休克蛋白家族中的主要成員，具有廣泛的生理功能，

3、可參與調(diào)節(jié)多種蛋白質(zhì)在非應(yīng)激條件下的生物活性。然而，對HSP90的胞內(nèi)作用底物以及細胞中調(diào)節(jié)因子的有無，只有框架性的了解。我們克隆了一個新的TPR蛋白HBP21，從線蟲到小鼠中都發(fā)現(xiàn)類似蛋白的表達，然其具體生物學(xué)功能尚無詳細研究。本研究通過酵母雙雜交和GST Pull-Down證實HSP90與HBP21之間可以發(fā)生相互作用，且其作用位點為三聯(lián)TPR結(jié)構(gòu)域及HSP90的C端結(jié)構(gòu)域。RT-PCR表明生理狀態(tài)下，人RPE細胞中兩者都有一定水平