HSP70反義寡脫氧核苷酸促進(jìn)MRC-5細(xì)胞衰老的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、【目的】通過人類HSP70(heatshockprotein70，熱休克蛋白70)反義寡脫氧核苷酸，阻斷MRC-5細(xì)胞(人胚肺二倍體成纖維細(xì)胞)HSP70蛋白表達(dá)，觀察不同時(shí)間點(diǎn)HSP70蛋白水平、細(xì)胞凋亡及G1期細(xì)胞比例的變化，探討HSP70與細(xì)胞衰老及細(xì)胞凋亡的關(guān)系。 【方法】1)根據(jù)不同OND(oligodeoxynucleotides，寡脫氧核苷酸)及脂質(zhì)體濃度設(shè)計(jì)ODN組、脂質(zhì)體組、ODN-脂質(zhì)體復(fù)合物組及空白對照組共

2、21個(gè)組別，用MTT法測定各處理方式對MRC-5細(xì)胞增殖的影響。 2)用第一步實(shí)驗(yàn)確定的正義寡脫氧核苷酸和反義寡脫氧核苷酸(anti-senseoligodeoxynucleotides，AS-ODN)及脂質(zhì)體的最佳作用濃度分別轉(zhuǎn)染兩組細(xì)胞，于轉(zhuǎn)染后12小時(shí)、1天、3天和5天，用流式細(xì)胞儀、免疫熒光顯微鏡檢測HSP70蛋白的熒光強(qiáng)度、細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期。 3)設(shè)立正義、反義和空白對照三個(gè)組，分別于轉(zhuǎn)染后2天、4天和6天取

3、各組細(xì)胞爬片，行衰老相關(guān)的β半乳糖苷酶(senescence-associatedβ-Gal，SA-β-Gal)染色檢測藍(lán)染細(xì)胞。 【結(jié)果】1)各時(shí)間點(diǎn)反義組蛋白表達(dá)均低于正義組(P＜0.05)，且其抑制作用在轉(zhuǎn)染后12小時(shí)最強(qiáng)。反義和正義組細(xì)胞在轉(zhuǎn)染后均出現(xiàn)蛋白表達(dá)高峰，但反義組高峰(轉(zhuǎn)染后第1天)較正義組高峰(轉(zhuǎn)染后第3天)提前。 2)各時(shí)間點(diǎn)反義組細(xì)胞凋亡率均高于正義組(P＜0.05)，兩組細(xì)胞凋亡率均在轉(zhuǎn)染后第1