Toll樣受體2及4在血清陰性脊柱關(guān)節(jié)病患者外周血單核細(xì)胞的表達(dá)及其意義.pdf

1、背景：血清陰性脊柱關(guān)節(jié)?。⊿eronegative Spondyloarthropathy, SpA）是一組具有共同特征的相互關(guān)聯(lián)的侵犯脊柱、外周關(guān)節(jié)和關(guān)節(jié)周圍組織的多系統(tǒng)炎性疾病的總稱。其病因不明，一般認(rèn)為與遺傳和環(huán)境因素有關(guān)。其中細(xì)菌感染在SpA的發(fā)生及復(fù)發(fā)中起著重要的作用。Toll樣受體（Toll-like receptors, TLRs）作為一種模式識(shí)別受體，在抗感染免疫中首先被人們認(rèn)識(shí)，TLRs激活后引發(fā)細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)最終導(dǎo)致

2、炎性介質(zhì)的釋放，啟動(dòng)炎癥和適應(yīng)性免疫應(yīng)答。目前的研究認(rèn)為TLRs信號(hào)通路參與慢性免疫性炎性關(guān)節(jié)炎的發(fā)生、發(fā)展，對(duì)TLRs的深入研究將有助于SpA發(fā)病機(jī)制的了解，并為治療提供新的思路。
　　目的：檢測(cè)TLR2和TLR4在SpA患者外周血CD14+單核細(xì)胞表面的表達(dá)變化；探討TLR2和TLR4表達(dá)水平與SpA患者病情活動(dòng)性的關(guān)系；檢測(cè)SpA患者血清高遷移率族蛋白-1（high mobility group box chromodoma

3、l protein1, HMGB1）、血清白介素-6（Interleukin-6,IL-6）、腫瘤壞死因子-α（Tumor necrosis factor-α,TNF-α）與健康對(duì)照的差異；分析SpA患者血清HMGB1濃度與TLR2、TLR4表達(dá)水平及炎癥指標(biāo)的關(guān)系。
　　方法：根據(jù)有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)選擇SpA患者71例及健康人30例作為研究對(duì)象。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)分別檢測(cè)CD14+單核細(xì)胞表面TLR2和TLR4陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)水平并進(jìn)行比較。應(yīng)

4、用雙抗體夾心固相酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定血清HMGB1、IL-6、TNF-α的濃度水平，收集患者臨床資料并計(jì)算SpA患者bath疾病活動(dòng)指數(shù)（Bath Ankylosing Spondylitis Disease Activity Index, BASDAI）評(píng)分。根據(jù)BASDAI評(píng)分將SpA患者組分為活動(dòng)組54例（BASDAI評(píng)分＞4）和非活動(dòng)組17例（BASDAI評(píng)分≤4），分別比較正常對(duì)照組、活動(dòng)組和非活動(dòng)組三組間TLR2

5、、TLR4表達(dá)水平的差異以及血清HMGB1、IL-6、TNF-α濃度水平的不同。最后將TLR2、TLR4表達(dá)水平分別與IL-6、TNF-α、HMGB1的濃度水平及血沉（ESR）、C反應(yīng)蛋白（CRP）、免疫球蛋白（Ig）和BASDAI評(píng)分等臨床資料進(jìn)行相關(guān)性分析。
　　結(jié)果：
　　1. SpA患者外周血CD14+單核細(xì)胞中TLR2+細(xì)胞所占比例為86.7±14.6（％）與正常對(duì)照組82.82±8.60（%）差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

6、=0.729）；TLR2+細(xì)胞的平均熒光強(qiáng)度（mean fluorescence intensity, MFI）為143.4±91.7與正常對(duì)照組116.8±86.1，統(tǒng)計(jì)學(xué)尚無(wú)差異（P=0.870）。TLR4+細(xì)胞所占比例為39.4±10.1（%），高于正常對(duì)照組22.3±7.5（%）差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）；TLR4+細(xì)胞的MFI為33.2±15.9，正常對(duì)照組28.3±11.6差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.245）。

7、　　2.將患者組依BASDAI分為活動(dòng)組與非活動(dòng)組，其中TLR2+細(xì)胞的比例在活動(dòng)、非活動(dòng)及正常對(duì)照組的各組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。TLR2+細(xì)胞的MFI在各組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。TLR4+細(xì)胞的比例在非活動(dòng)組和活動(dòng)組（32.9±11.4,42.5±16.1）與正常組相比(22.3±8.0)有顯著性差異(P<0.001)，活動(dòng)組和非活動(dòng)組之間相比有顯著性差異（P<0.001）。TLR4+細(xì)胞的MFI在各組

8、間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。
　　3. SpA患者血清HMGB1、IL-6、TNF-α濃度水平在SpA患者非活動(dòng)組和活動(dòng)組分別為[11.9±5.5(ng/ml),5.74±2.4(pg/ml),36.5±10.3(pg/ml);15.7±6.8(ng/ml),8.36±4.1(pg/ml),64.2±16.1(pg/ml)]與正常組相比[7.2±4.8(ng/ml);10.8±8.0(pg/ml);2.87±1.1(pg

9、/ml)]均有顯著性差異(P<0.001)，活動(dòng)組和非活動(dòng)組之間相比亦均有顯著性差異（P<0.001）。
　　4.患者血清HMGB1濃度水平與患者血清IL-6濃度水平成正相關(guān)(r=0.511， P=0.000)；患者血清HMGB1濃度水平與患者血清TNF-α濃度水平成正相關(guān)(r=0.481, P=0.000)。
　　5. TLR2表達(dá)與臨床資料及細(xì)胞因子的相關(guān)性：TLR2＋細(xì)胞的比例與患者ESR呈正相關(guān)（r=0.296，P=

10、0.017）與血清IgG定量呈正相關(guān)（r=0.357，P=0.011）。TLR2+細(xì)胞的MFI與患者ESR呈正相關(guān)（r=0.361，P=0.04）；與血清IgA定量呈正相關(guān)（r=0.327，P=0.023）；與血清IgG定量呈正相關(guān)（r=0.285，P=0.049）。
　　6. TLR4表達(dá)與臨床資料及細(xì)胞因子的相關(guān)性：TLR4+細(xì)胞的比例與血清HMGB1濃度水平成正相關(guān)(r=0.284,P=0.020)；與患者血清IL-6濃度水

11、平成正相關(guān)(r=0.451， P=0.000)；與患者血清TNF-α濃度水平成正相關(guān)，(r=0.342，P=0.004)；TLR4+細(xì)胞的比例與患者ESR呈正相關(guān)（r=0.299，P=0.016）；與血清IgA定量呈正相關(guān)（r=0.355，P=0.011）；與BASDAI呈正相關(guān)（r=0.325，P=0.007）。
　　結(jié)論：
　　1. SpA患者外周血單核細(xì)胞表面TLR4表達(dá)升高，與正常對(duì)照組相比有顯著性差異。提示TLR4

12、與SpA發(fā)病有關(guān)。
　　2. TLR4表達(dá)水平與ESR和IgA呈正相關(guān)，TLR4表達(dá)水平與BASDAI呈正相關(guān)。TLR2表達(dá)水平與ESR和IgG呈正相關(guān)；提示SpA患者外周血單核細(xì)胞TLR2、TLR4表達(dá)水平可作為判斷SpA患者疾病活動(dòng)度的參考指標(biāo)。
　　3. SpA患者血清HMGB1明顯升高且與IL-6、TNF-α呈正相關(guān)，提示HMGB1與SpA疾病活動(dòng)有關(guān)。
　　4. SpA患者血清HMGB1濃度水平與TLR4正相