白藜三醇對實(shí)驗(yàn)性動(dòng)脈粥樣硬化家兔心臟缺血再灌注損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的: 采用結(jié)扎實(shí)驗(yàn)性動(dòng)脈粥樣硬化家兔左冠狀動(dòng)脈前降支法建立在體急性心肌缺血再灌注模型，觀察白藜三醇(Resveratrol，RV)慢性給藥對家兔缺血再灌注心臟心功能的影響以及白藜三醇結(jié)合蛋白(Resveratrol bindingproteins，RBPs)-NQO2、GST-pi表達(dá)水平的變化，探討白藜三醇對缺血再灌注心肌的保護(hù)作用并初步探討其相關(guān)機(jī)制。 方法: 以高脂飲食聯(lián)合免疫損傷的方法建立兔的動(dòng)脈粥樣硬化模型：24只雄

2、性同本大耳白兔隨機(jī)分成3組，分別為：正常對照(Control)組，即C組，喂飼正常飼料6周：動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)組，即AS組，予小牛血清1mg/ml耳緣靜脈一次性注射后，即喂飼高脂飼料6周：白藜三醇(Resveratrol，RV)組，即RV組，采用與AS組相同的方法建立AS模型，同時(shí)予RV(4mg/kg)灌胃6周。6周后建立家兔在體急性心肌缺血再灌注模型，各組均予以結(jié)扎LAD 30min，再灌注2h后取材

3、。 Maclab生理記錄儀監(jiān)測心電圖變化，記錄左室舒張末壓(LVEDP)、左室內(nèi)壓最大上升/下降速率(±dp/dtmax)；分別用硫代巴比妥酸法和黃嘌呤氧化酶法測定缺血再灌注前后血漿MDA、SOD水平；RT-PCR法檢測心肌組織中NQO2、GST-pimRNA表達(dá)水平，Western-Blot法檢測心肌組織NQO2、GST-pi、NF-κBp65、IκBα、JNK、p-JNK蛋白表達(dá)水平，HE染色觀察各組心肌形態(tài)學(xué)改變。

4、 結(jié)果: 1.RT-MR結(jié)果：測定再灌注2h后心肌組織NQO2、GST-pi mRNA表達(dá)水平，結(jié)果顯示：RV組GST-pi、NQO2的表達(dá)較AS組均明顯增加(P<0.05)，但與C組比較未發(fā)現(xiàn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，AS組GST-pi、NQO2的表達(dá)較C組明顯減少(P<0.05)。 2.Western-Blot結(jié)果：測定再灌注2h后心肌組織蛋白GST-pi、NQO2、NF-κBp65、IκBα、JNK、p-JNK

5、表達(dá)水平，結(jié)果顯示：①RV組GST-pi、NQO2、IκBα的表達(dá)較AS組咀顯增加(P<0.05)，但與C組比較未發(fā)現(xiàn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，AS組GST-pi、NQO2、IκBα的表達(dá)較C組明顯減少(P<0.05)：②RV組NF-κBp65、p-JNK的表達(dá)較AS組明顯減少(P<0.05)，但與C組比較未發(fā)現(xiàn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，AS組NF-κp65、p-JNK的表達(dá)較C組明顯增加(P<0.05)；③JNK的表達(dá)在各組間

6、無明顯差異(P>0.05)。 3.血漿生化指標(biāo)：(1) 缺血前，MDA、SOD值在三實(shí)驗(yàn)組間均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；(2) 再灌注2h后：①與缺血前比較，三組MDA明顯升高，SOD降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；②組間比較，RV組MDA值明顯低于AS組(P<0.05)，與C組比較未發(fā)現(xiàn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，AS組MDA值明顯高于C組(P<0.05)；RV組SOD值明顯高于AS組(P<0.05)，與C組比較

7、未發(fā)現(xiàn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，AS組SOD值明顯低于C組(P<0.05). 4.心功能參數(shù)：(1) 缺血前，左室舒張末壓，左室內(nèi)壓最大上升、下降速率在三實(shí)驗(yàn)組間均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；(2) 再灌注2h后：①與缺血前比較，三組LNEDP升高，±dp/dtmax降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；②組間比較，RV組LVEDP低于AS組(P<0.01)，與C組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，AS組LVEDP高于C

8、組(P<0.05)；RV組±dp/dtmax高于AS組(P<0.01)，與C組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，AS組±dp/dtmax低于C組(P<0.05)。 5.光鏡結(jié)果：HE染色光鏡下觀察，AS組心肌損傷病理改變較明顯：部分心肌纖維斷裂、溶解，收縮帶多、范圍大，胞漿染色較濃，心肌間質(zhì)水腫明顯；RV組，C組心肌損傷病理改變輕于AS組：心肌纖維排列較整齊，斷裂溶解的肌纖維較少，收縮帶少、范圍小，胞漿染色較淡，心肌間質(zhì)輕度水腫

9、。 6.相關(guān)分析結(jié)果：NQO2，GST-pi的表達(dá)與±dp/dtmax呈正相關(guān)(r=0.762，0.946，0.840，0.914 P<0.05)；p-JNK、NF-κBp65的表達(dá)與±dp/dtmax呈負(fù)相關(guān)(r=-0.760，-0.788，-0.863，-0.765.P<0.05)。 結(jié)論： 1.白藜三醇可以減輕實(shí)驗(yàn)性動(dòng)脈粥樣硬化家兔心肌缺血再灌注損傷。 2.白藜三醇可以上調(diào)實(shí)驗(yàn)性動(dòng)脈粥樣硬化家兔缺血