骨髓間質(zhì)干細胞靜脈移植對損傷大鼠脊髓BDNF、NGF、TNF-α、IL-1β表達的影響.pdf

1、目的探討骨髓間質(zhì)干細胞移植治療大鼠脊髓損傷的作用及可能機制。 方法1．體外分離培養(yǎng)rMSCs，流式細胞術(shù)(FCM)檢測其表面標(biāo)志。 2．運用改良Allen法制備大鼠胸10脊髓外傷性截癱模型，假手術(shù)組12只，損傷組120只隨機分為對照組和rMSCs移植組，每組有3小時、6小時、12小時、24小時、3天、7天、14天7個時相點，每個時相點6只大鼠(其中3天、7天、14天這3個時相點每組各12只大鼠)。對照組和rMSCs移植組

2、、假手術(shù)組于損傷后10min經(jīng)尾靜脈分別注射磷酸鹽緩沖液(PBS)lml和4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)標(biāo)記rMSCs單細胞PBS懸液lml(1x106個rMSCs)。 3．移植后24小時、3天、7天、14天，應(yīng)用BBB評分法評價治療前后損傷大鼠運動功能改善狀況。 4．移植后14天，應(yīng)用光鏡及電子顯微鏡觀察損傷脊髓組織形態(tài)學(xué)變化；移植后3天、7天，應(yīng)用熒光激發(fā)及免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測rMSCs在體內(nèi)遷移、存活情況

3、及損傷大鼠脊髓腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(brain-derivedneurotrophicfactor,BDNF)、神經(jīng)生長因子(NerveGrowthFactor,NGF)、腫瘤壞死因子-α(tumornecrosisfactor-a,TNF-α)、白介素-1p(interleukinl-β，IL-1β)蛋白表達變化情況。 5．移植后3小時、6小時、12小時、24小時、3天、7天、14天，應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄．聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法

4、檢測損傷大鼠脊髓BDNF、NGF、TNF-(1、IL-1pmRNA表達變化情況。 結(jié)果1．rMSCs移植組與對照組損傷大鼠的運動功能均有不同程度的恢復(fù)。rMSCs移植組損傷區(qū)脊髓結(jié)構(gòu)與對照組相比，相對較完整，表現(xiàn)出較明顯的運動功能改善(P<0．05)。 2．rMSCs移植組可見DAPI標(biāo)記的細胞在損傷區(qū)及其周邊區(qū)明顯聚集并存活。 3．對照組和rMSCs移植組損傷脊髓IL．1B、TNF-ct、BDNF、NGF蛋白及

5、其mRNA表達較假手術(shù)組有明顯增加(p<0．05)；rMSCs移植組與對照組比較，IL．1β、TNF-et蛋白及其mRNA表達受到明顯抑制(p<0．05)，而rMSCs移植組與對照組比較，BDNF、NGF蛋白及其mRNA表達增加更為明顯(P<0．05)。 結(jié)論rMSCs靜脈移植后在宿主體內(nèi)可向損傷處脊髓遷移、存活并改變脊髓損傷區(qū)的微環(huán)境，上調(diào)損傷脊髓局部的BDNF、NGF，使TNF-a、IL-1β表達降低。這可能是減少脊髓繼發(fā)性