赤芍總苷抗實(shí)驗(yàn)性肝損傷和抗乙型肝炎病毒的藥效學(xué)研究.pdf

1、我國(guó)的中藥資源十分豐富，一些傳統(tǒng)的中藥方劑對(duì)慢性乙型肝炎具有肯定的療效，而且毒副作用輕，是有待開(kāi)發(fā)的理想藥物，尤其是單味中藥。經(jīng)過(guò)多年臨床觀察、反復(fù)篩選、不斷優(yōu)化，本研究選用從赤芍中提取的赤芍總苷，擬將其開(kāi)發(fā)為新一代的抗肝損傷和抗乙肝病毒的中藥新藥。 1.研究目的： 1.1采用D一氨基半乳糖(D-GalN)和刀豆蛋白A(COn A)所致肝損傷的動(dòng)物模型研究赤芍總苷的保肝降酶及抗氧化作用。 1.2在體內(nèi)外觀察赤芍總

2、苷抗乙肝病毒作用。 2.實(shí)驗(yàn)步驟 2.1赤芍總苷抗D-氨基半乳糖(D-GalN)所致的肝損傷作用。 2.2赤芍總苷抗Con A所致的肝損傷作用。 2.3赤芍總苷體內(nèi)抗鴨乙肝病毒的實(shí)驗(yàn)研究。 2.4赤芍總苷體外抗乙肝病毒的實(shí)驗(yàn)研究。 3.實(shí)驗(yàn)方法 3.1 NIH小鼠60只，隨機(jī)分5組，分別為正常對(duì)照組，模型組，赤芍總苷高劑量組、低劑量組和聯(lián)苯雙酯組，赤芍總苷高劑量組、低劑量組和聯(lián)苯雙

3、酯組小鼠分別灌胃給藥，1次/d，連續(xù)7d，末次給藥1h后，除正常對(duì)照組外，其余各組小鼠均腹腔注射D-GalN800mg/Kg，16h后采血，檢測(cè)血清ALT、AST活性及超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量，并觀察肝組織病理學(xué)變化。 3.2 50只NIH小鼠隨機(jī)分為5組，分別為正常對(duì)照組、模型組、赤芍總苷高劑量組(20mg/kg)、赤芍總苷低劑量組(10mg/kg)和聯(lián)苯雙酯治療組。除正常對(duì)照組外，其他組于實(shí)驗(yàn)首日靜

4、脈注射Con A20mg/kg后，赤芍總苷高劑量組、低劑量組、聯(lián)苯雙酯組分別以20mg/kg、10mg/kg、150mg/kg灌胃口服，每天1次，連續(xù)3d，末次給藥后4h，再次靜脈注射Con A 20mg/kg，8h后檢測(cè)血漿ALT、AST活性和TNF-α含量，觀察肝組織病理學(xué)變化。 3.3 將先天感染鴨隨機(jī)分為4組，每組6-7只不等，分別為病毒對(duì)照組，ACV組，赤芍總苷高劑量組、赤芍總苷低劑量組。赤芍總苷以20mg.kg、10

5、mg/kg灌胃：ACV按100mg/kg灌胃，共10天。對(duì)照組未做處理。分別于T<,0>、T<,5>、T<,10>、P<,3>各時(shí)間點(diǎn)采血，用斑點(diǎn)雜交法測(cè)定血清中DHBV的載量變化。 3.4 用2.2.15細(xì)胞作為細(xì)胞模型，將赤芍總苷分為7個(gè)劑量組，上藥6d后用ELISA法測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)上清中的HBeAg和HBsAg含量，并用MTT法測(cè)定藥物對(duì)細(xì)胞的毒性，計(jì)算赤芍總苷的治療指數(shù)。 4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果 4.1赤芍總苷高劑量

6、組能顯著降低D-GalN所致小鼠肝損傷血清ALT、AST活性，提高肝組織勻漿SOD活性，降低MDA，明顯改善肝組織損傷的程度，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。 4.2赤芍總苷高劑量組小鼠ALT活性、AsT活性和TNF-α含量均明顯低于模型組，差異有顯著性意義(P<0.05)，但與聯(lián)苯雙酯組比較，差異無(wú)顯著性意義(P>0.05)；赤芍總苷高劑量組肝臟病理改變明顯減輕。 4.3赤芍總苷高劑量組在給藥第l0d時(shí)血

7、清DHBV DNA含量有顯著性下降(P<0.01)；在停藥后第3d，赤芍總苷高劑量組血清DHBV DNA含量又有回升，與對(duì)照組現(xiàn)比，P>0.05；說(shuō)明赤芍總苷在給藥第lOd在體內(nèi)有抑制DHBV作用，但是停藥后有反跳現(xiàn)象。 4.4赤芍總苷作用于2.2.15細(xì)胞株6d后，對(duì)2.2.15細(xì)胞株的半數(shù)毒性濃度為0.17 mg/L，對(duì)HBsAg的半數(shù)抑制濃度為0.15 mg/L、對(duì)HBeAgI~半數(shù)抑制濃度為0.06mg/L；對(duì)HBsAg

8、治療指數(shù)為1.12，對(duì)HBeAg治療指數(shù)為2.75。 5.結(jié)論： 5.1赤芍總苷對(duì)D-Ga1N誘導(dǎo)的小鼠肝損傷有保護(hù)作用，其作用機(jī)制可能與抗氧自由基的損傷有關(guān)。 5.2赤芍總苷對(duì)Con A所致小鼠肝損傷具有較好的保護(hù)作用，抑制T淋巴細(xì)胞活化和TNF-α的釋放是其主要的作用機(jī)制。 5.3赤芍總苷具有體內(nèi)抗鴨乙肝病毒的作用，但在停用后DHBV DNA含量回升。 5.4赤芍總苷在體外細(xì)胞培養(yǎng)中對(duì)HBsA