走馬胎三萜皂苷類化合物的分離及Ag3的生物轉化研究.pdf

1、走馬胎（Ardisia gigantifolia stapf）為紫金?？谱辖鹋僦参锏母稍锔o，具有祛風濕壯筋骨、活血化瘀、止血生肌等功效[1]，主產(chǎn)于云南、廣西、廣東、江西、福建等地[2]。從本屬植物中發(fā)現(xiàn)越來越多的生物活性成分，特別是三萜皂苷具有顯著的抗腫瘤活性，對胃癌、肝癌、結腸癌、鼻咽癌、宮頸癌、肺癌、膀胱癌、胸腺癌等癌細胞均有抑制作用[3]。為研究走馬胎抗腫瘤活性成分特別是三萜皂苷類化合物，本研究重點分離、純化皂苷類物質，共得

2、到6個已知的三萜皂苷類化合物，其中化合物Ag3的含量較高（1.1％）且對多種腫瘤細胞的增殖均有明顯的抑制作用。由于從植物中提取分離足夠量的活性單體皂苷進行構效關系研究有較大難度，所以本文采用生物轉化的方法來得到結構多樣性的皂苷。即利用生物轉化的方法，選擇鏈格孢、燕麥曲霉為發(fā)酵菌株、化合物3β-O-{?-L-吡喃鼠李糖基-(1→3)-[β-D-吡喃木糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)]

3、-α-L-吡喃阿拉伯糖基}-西克拉敏A(簡稱為Ag3)為目標底物，利用微生物轉化的方法得到5個轉化產(chǎn)物，其中4個為新化合物。
　　已知化合物分別被鑒定為：3?-O-{α-L-吡喃鼠李糖基-(1→3)-[β-D-吡喃木糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)]-?-L-吡喃阿拉伯糖基}-西克拉敏 A(Ag3)；3β-O-{α-L-吡喃鼠李糖基-(1→3)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→

4、3)-β-D-吡喃木糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)]-α-L-吡喃阿拉伯糖基}-16β-羥基-13?,28-環(huán)氧-齊墩果烷（2）；lysikoianoside（3）；3β-O-{α-L-吡喃鼠李糖基-(1→3)-[β-D-吡喃木糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)]-α-L-吡喃阿拉伯糖基}-16α-羥基-13?,28-環(huán)氧-齊

5、墩果烷（4）；3?-O-{α-L-吡喃鼠李糖基-(1→3)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-β-D-吡喃木糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)]-α-L-吡喃阿拉伯糖基}-西克拉敏 A（5）；3β-O-{α-L-吡喃鼠李糖基-(1→3)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-β-D-吡喃木糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)]-α-

6、L-吡喃阿拉伯糖基}-16α-羥基-30-乙酰氧基-13,28-環(huán)氧-齊墩果烷（6）；3β-O-{α-L-吡喃鼠李糖基-(1→3)-[β-D-吡喃木糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)]-α-L-吡喃阿拉伯糖基}-16α-羥基-30-乙酰氧基-13,28-環(huán)氧-齊墩果烷（7）。
　　新化合物被鑒定為：3-O-{α-L-吡喃鼠李糖基-(1→3)-[β-D-吡喃木糖基-(1→2)]-

7、β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-α-L-吡喃阿拉伯糖基}-3β,16α,30-三羥基-13,28-環(huán)氧-齊墩果烷（8*）；3-O-{α-L-吡喃鼠李糖基-(1→3)-[β-D-吡喃木糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-α-L-吡喃阿拉伯糖基}-西克拉敏A（9*）；3-O-{α-L-吡喃鼠李糖基-(1→3)-[β-D-吡喃木糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)]-α-

8、L-吡喃阿拉伯糖基}-3β,16α,22α-三羥基-13,28-環(huán)氧-30-醛基-齊墩果烷(10*)；3-O-{α-L-吡喃鼠李糖基-(1→3)-[β-D-吡喃木糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)]-α-L-吡喃阿拉伯糖基}-3β,16α,22α-三羥基-13,28環(huán)氧-齊墩果烷（11*）。
　　運用體外細胞計數(shù)法（CCK法），對分離得到的化合物Ag3、轉化產(chǎn)物化合物8、9、1

9、0、11進行抗腫瘤藥理活性篩選，在肝癌細胞Bel-7402、HepG2、SMMC-7721和正常肝細胞L02模型上，全部化合物均顯示出較好的抗腫瘤活性；其中化合物8對HepG2的抑制作用優(yōu)于陽性藥表柔比星，也優(yōu)于底物 Ag3，毒性小于表柔比星，有應用于臨床的可能性。因此進一步考察了化合物8對HepG2肝癌細胞周期及凋亡的影響，研究結果表明，化合物8可損傷肝癌細胞的DNA，將細胞阻滯在S期，并且阻滯了蛋白質和RNA的合成而進一步誘導凋亡，

10、抑制細胞增殖，其具體的作用機制還需進一步的深入研究。
　　本文還對上述化合物抗腫瘤的構效關系進行了初步的研究和分析，選取肝癌細胞HepG2，運用CCK-8試劑盒將得到的11個化合物進行體外抗腫瘤活性測試，發(fā)現(xiàn)化合物1、4、5、6、7、8、10、11均有較強的抑制腫瘤細胞增殖的活性，與陽性藥表柔比星相當，提示抗腫瘤活性與糖鏈中糖的數(shù)量無明顯的關系；酸水解后的產(chǎn)物無活性[4]，表明13,28位的環(huán)氧醚橋結構和30位基團可能為抗腫瘤活性