中藥健脾養(yǎng)胃方治療胃癌作用機(jī)理的研究.pdf

1、目的:胃癌(Gastric Cancer)是消化道最常見惡性腫瘤之一。世界范圍內(nèi)最常見惡性腫瘤中胃癌居第四位。中國是胃癌高發(fā)地區(qū)，患者幾乎占全球胃癌患者的一半，發(fā)病有年輕化趨勢，嚴(yán)重威脅人類健康。中藥健脾養(yǎng)胃方在臨床上對胃癌的術(shù)后復(fù)發(fā)預(yù)防、改善癥狀、減少副反應(yīng)及延長生存期方面均取得較好效果。但是其在腫瘤的治療中其作用地位、作用點(diǎn)、作用效應(yīng)強(qiáng)度依然受到質(zhì)疑，其抗腫瘤的確切機(jī)理尚未完全明確，需要有更大量確切的現(xiàn)代醫(yī)學(xué)數(shù)據(jù)支持及闡明。因此，本

2、實(shí)驗(yàn)?zāi)康木褪欠治鲋兴幗∑B(yǎng)胃方，探討其治療胃癌的細(xì)胞和分子生物學(xué)作用機(jī)理，為臨床應(yīng)用提供科學(xué)數(shù)據(jù)和指導(dǎo)。
　　方法:1采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)技術(shù)分析鑒定健脾益胃方水提液和醇提液中的有效化合物成分;2以SGC-7901胃癌細(xì)胞株進(jìn)行體外細(xì)胞學(xué)試驗(yàn)，采用MTT試驗(yàn)、Transwell試驗(yàn)及流式細(xì)胞技術(shù)，研究研究健脾養(yǎng)胃方對腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲、凋亡及周期等幾方面的作用，并以抗腫瘤藥物作為陽性對照。3以荷瘤裸鼠和SGC-7

3、901胃癌細(xì)胞株進(jìn)行體內(nèi)動(dòng)物性試驗(yàn)，制作胃癌移植瘤模型，采用病理組織切片、免疫組化和WesternBlotting檢測基因表達(dá)技術(shù)，研究健脾養(yǎng)胃方干預(yù)后的病理組織中胃癌相關(guān)分子的表達(dá)。
　　結(jié)果:1 LC-MS技術(shù)分析:健脾養(yǎng)胃方水提液和醇提液處方中均至少含有一定量要鑒定的有效成分。在同一藥物濃度下，醇提液各化合物含量多高于水提液。2體外細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn):①健脾養(yǎng)胃方組在一定濃度范圍內(nèi)，對細(xì)胞增殖有顯著的抑制作用，抑制率呈正向梯度改變，

4、與空白組相比，P＜0.01;②健脾養(yǎng)胃方干預(yù)組穿過Transwell微孔濾膜的細(xì)胞數(shù)(67.3±18.3)明顯低于對照組(229.7±40.2)，P＜0.01③健脾養(yǎng)胃方組細(xì)胞凋亡率顯著高于對照組，尤以晚期凋亡較為明顯(P＜0.01)。④健脾養(yǎng)胃方組S期縮短，G2/M期則延長。3體內(nèi)動(dòng)物學(xué)實(shí)驗(yàn):①與對照組相比，健脾養(yǎng)胃方組可延緩裸鼠體重下降。②健脾養(yǎng)胃方可以減少Ki67的表達(dá);③與對照組相比健脾養(yǎng)胃方顯著減少M(fèi)MP-9的表達(dá)(P＜0.0

5、1);④健脾養(yǎng)胃方可以減少Bcl-2的表達(dá);⑤與對照組相比，健脾養(yǎng)胃方可以減少VEGF的表達(dá)(P＜0.01);⑥與對照組相比，健脾養(yǎng)胃方可減少PI3K、pAKT、NF-kB的表達(dá)(P＜0.01);⑦健脾養(yǎng)胃方可以激活抗癌基因和抑制癌性基因的表達(dá)，如增加PTEN蛋白的表達(dá)(P＜0.01)，降低CXCR2的表達(dá)。
　　結(jié)論:藥物提取，醇提效率明顯優(yōu)于水提，體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究表明，健脾益胃方中具有一定含量的多種有效化合成分，發(fā)揮多種抗腫瘤效