大鼠急性腦出血條件下的血液流變學(xué)改變及粘附分子的表達(dá).pdf

1、目的： 腦出血后血腫周圍組織存在微循環(huán)障礙，最終導(dǎo)致繼發(fā)性腦損傷。血液流變學(xué)異常作為機(jī)體重要的調(diào)節(jié)途徑，可能在此過(guò)程中起到積極的促進(jìn)作用。本研究制作大鼠內(nèi)囊出血模型，從血液流變學(xué)角度出發(fā)，觀察其在腦出血后的經(jīng)時(shí)變化，總結(jié)內(nèi)在規(guī)律，以探討腦微循環(huán)障礙的機(jī)制，同時(shí)擬從粘附分子——ICAM-1、VCAM-1水平闡述繼發(fā)性腦損傷的病理過(guò)程及其對(duì)血液流變學(xué)的影響。這不僅讓我們對(duì)腦出血后繼發(fā)性損傷有嶄新的認(rèn)識(shí)，而且對(duì)于采取積極有效的干預(yù)措施

2、，改善腦出血患者的預(yù)后有非常重要的指導(dǎo)意義。 方法： 1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組：Wistar大鼠70只，隨機(jī)分為生理鹽水對(duì)照組和腦出血組，根據(jù)術(shù)后觀察時(shí)間每組又分為3 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、7 d七個(gè)亞組；上述每個(gè)時(shí)限點(diǎn)，生理鹽水對(duì)照組每組4只，腦出血組每組6只。 2 自體血注入法建立大鼠內(nèi)囊出血模型：大鼠麻醉后，固定于鼠腦立體定位儀上。根據(jù)大鼠腦立體定位圖譜，利用立體定位儀準(zhǔn)確定位內(nèi)囊后

3、肢，于定位點(diǎn)利用牙科鉆施行顱骨打孔術(shù)，斷尾取血100μl，用微量注射器于內(nèi)囊位置注入，建立內(nèi)囊出血的大鼠模型。對(duì)照組注入等量生理鹽水。 3 大鼠造模后行為學(xué)評(píng)價(jià)：采用Bederson評(píng)分方法和觸須誘發(fā)前肢放置檢測(cè)法對(duì)大鼠進(jìn)行造模后行為學(xué)評(píng)價(jià)。 4 大鼠腦組織病理標(biāo)本制備及病理形態(tài)學(xué)觀察：各組大鼠造模成功后在不同時(shí)限點(diǎn)迅速取腦，固定于10％甲醛溶液中，石蠟包埋，于內(nèi)囊出血區(qū)冠狀面做腦組織切片，HE染色，光鏡下觀察其病理學(xué)的

4、改變。 5 大鼠血腫周圍腦組織ICAM-1、VCAM-1的表達(dá)：采用ICAM-1、VCAM-1試劑盒對(duì)腦切片進(jìn)行免疫組化染色，觀察陽(yáng)性細(xì)胞及血管表達(dá)情況并計(jì)數(shù)。 6 血液流變學(xué)檢測(cè)：達(dá)到觀察時(shí)限點(diǎn)后，麻醉大鼠，無(wú)菌操作下開(kāi)胸，暴露心臟，無(wú)菌注射器自左心室采血4．5 ml，置于用肝素抗凝管中送生化室。全自動(dòng)血流變儀檢測(cè)全血高切粘度（150s-1）、全血低切粘度（10s-1）、血漿粘度和紅細(xì)胞聚集指數(shù)，自動(dòng)生化分析儀采用比濁

5、法測(cè)纖維蛋白原含量，離心沉淀法測(cè)紅細(xì)胞壓積。 7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：應(yīng)用SPSS11．5軟件，數(shù)據(jù)結(jié)果均用x±s表示，組內(nèi)比較及組間比較均采用方差分析中的SNK法，α=0．05。 結(jié)果： 1 大鼠自體血腦內(nèi)注入法復(fù)制大鼠內(nèi)囊出血模型的行為學(xué)測(cè)試：Bederson評(píng)分：可見(jiàn)出血組大鼠均不同程度的出現(xiàn)了軀體功能障礙的表現(xiàn)，均發(fā)生了2分以上的偏癱。觸須誘發(fā)前肢放置檢測(cè)法：腦出血組，出血對(duì)側(cè)前肢放置正確率為23％，出血同側(cè)放置

6、正確率為89％，提示內(nèi)囊出血模型建立后，動(dòng)物出現(xiàn)明顯的對(duì)側(cè)運(yùn)動(dòng)功能障礙。 2 通過(guò)大體標(biāo)本及病理切片確定出血部位正位于內(nèi)囊后肢，光鏡可見(jiàn)血腫區(qū)域及周邊部染色較淺，血腫部位腦組織充滿紅細(xì)胞，血腫周圍有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；并可見(jiàn)周圍腦組織細(xì)胞間隙變大，細(xì)胞腫脹，提示有腦水腫發(fā)生。 3 ICAM-1、VCAM-1免疫組化染色，對(duì)照組僅見(jiàn)少量陽(yáng)性血管，各時(shí)限點(diǎn)表達(dá)水平相同。出血組各時(shí)限點(diǎn)出現(xiàn)不同程度的陽(yáng)性反應(yīng)血管和細(xì)胞。出血后3 h即

7、有表達(dá)增強(qiáng)，24 h表達(dá)明顯，72 h達(dá)高峰，此時(shí)陽(yáng)性細(xì)胞和血管數(shù)量最多，而且染色均很強(qiáng)，持續(xù)至7 d仍有表達(dá)。 4 血液流變學(xué)檢測(cè)顯示出血后各參數(shù)都發(fā)生了異常改變，與對(duì)照組比較，全血粘度和血漿粘度均增高。全血高切粘度隨時(shí)間推移逐漸增高，在24 h達(dá)高峰，至7 d水平下降但仍高于對(duì)照組。全血低切粘度在48 h達(dá)高峰，7 d時(shí)接近對(duì)照組水平。血漿粘度和紅細(xì)胞壓積在出血后3 h即升高，24 h達(dá)高峰，隨后呈下降趨勢(shì)。紅細(xì)胞聚集指數(shù)增

8、強(qiáng)出現(xiàn)在6 h，高峰時(shí)間從12 h持續(xù)到48h，7 d時(shí)降低但仍高于對(duì)照組。纖維蛋白原含量在6 h升高，48 h升高最顯著，并持續(xù)至72 h，7 d時(shí)有所降低。 結(jié)論： 1 利用腦立體定位技術(shù)及自體血腦內(nèi)注入法可成功制作大鼠內(nèi)囊出血模型。 2 腦出血后血液流變學(xué)發(fā)生異常改變，血液粘度升高、紅細(xì)胞壓積增加、紅細(xì)胞聚集指數(shù)增強(qiáng)和纖維蛋白原含量增加共同作用，導(dǎo)致紅細(xì)胞聚集，變形能力降低，血液淤滯，腦血流量降低，微循環(huán)功