大蒜新素抑制E2F表達在抗巨細胞病毒感染機制中的作用.pdf

1、華中科技大學博士學位論文大蒜新素抑制E2F表達在抗巨細胞病毒感染機制中的作用姓名：劉志峰申請學位級別：博士專業(yè)：兒科學指導教師：方峰20040401+ # 中科技大學同濟醫(yī)學院 博士學位論文⑥用T J T V 3 0 0 型全自動圖像分析儀測定各目的條帶的積分光密度值，以內參照條帶進行上樣量校正，以校正值K ( K = 目的條帶的積分光密度／a c t i n 條帶的積分斃密度) 對各目的條帶進行半定量分析。【結果】①H C M V 感

2、染對E 2 F 蛋白表達的影響：低M O I 和高M O I 感染都可間斷上調宿主細胞E 2 F 蛋白表達，低M O I 感染的上調作用呈雙峰型，高峰出現(xiàn)在感染后2 h及1 6 h ：高M O I 感染的上調作用呈三峰型，高峰出現(xiàn)在感染后2 h 、1 6 h 及2 4 h ：均以感染后2 h 上調幅度最高。高M O I 感染的上調作用強于低M O I 感染。②H C M V 感染對d h f r 基因轉錄及表達的影響：低M O I 和高

3、M O I 感染在感染后2 4 h 內上調d h f r m R N A 轉錄水平，低M O I 感染的上調作用表現(xiàn)為雙峰型，峰值分別出現(xiàn)在感染后4 h 和1 6 h ，高M O I 感染的上調作用則在2 - 4 h 和1 6 h 較為明顯；D } ．i F R 蛋白表達也被上調，高M O I 感染除在i f h 和2 4 f i 外，其余時段上調明顯，而低M O I 感染除在2 h ，1 6 h ，2 4 h 和7 2 h 外，其余時

4、段呈上調效應，但不如高M O I感染明顯。③大蒜新素處理正常細胞對E 2 F 蛋白及d h f r 基因轉錄和表達的影響：大蒜新素處理正常細胞后2 h 可誘導E 2 F 蛋白表達水平明顯上調，其后還在1 6 h 及4 8 h ( 中劑量) 和2 0 h 及7 2 h ( 大劑量) 出現(xiàn)上調效應，但上調幅度不如2 h 時明顯：d h f r 轉錄水平僅在處理后2 h 見到明顯上調：但D H F R 蛋白表達水平在處理后2 0 h 及4 8

5、 —9 6 h 呈現(xiàn)逐漸明顯上升趨勢。④大蒜新素處理H C M V 感染細胞對E 2 F 蛋白表達的影響：大蒜新素處理低M O I 和高M O I 感染細胞可便病毒誘導上調的E 2 F 蛋白表達水平下調，大劑量藥物處理高M O I 感染細胞2 h 和1 6 h 時E 2 F 蛋白回復至正常細胞水平，其作用特點為：藥物對高M O I 感染細胞的拮抗作用優(yōu)于對低M O I 感染細胞的處理；大劑量藥物作用優(yōu)于中劑量藥物；對病毒在感染早期( 1

6、 6 h 內) 誘導效應的拮抗作用強于對病毒感染中期( 2 4 h ) 誘導效應的拮抗。⑤大蒜新索處理N C M 7 感染細胞d h f r 基因轉錄和表達的影響：藥物處理高M 0 [ 感染細胞4 —1 6 h 期間病毒誘導的d h f rm R N A 轉錄水平上調作用可被拮抗：低M O I 感染的誘導效應可被基本消除，但在高M O I 感染2 h 時藥物無拮抗作用。藥物處理低M O I 感染細胞在4 - 1 2 h 內可基本消除病毒