水貂腸炎細(xì)小病毒在體內(nèi)分布規(guī)律及相關(guān)細(xì)胞因子的變化.pdf

1、水貂病毒性腸炎（Mink parvoviral enteritis），是由水貂腸炎細(xì)小病毒（Mink enteritis virus MEV）引起的高度接觸性傳染病，發(fā)病水貂的主要臨床特征為劇烈腹瀉和嘔吐等，該病具有較高的發(fā)病率和死亡率。隨著毛皮動(dòng)物養(yǎng)殖業(yè)的迅速發(fā)展，此病也時(shí)常爆發(fā)，給水貂養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。因此研究水貂腸炎病毒的致病性和免疫相關(guān)因子變化對(duì)MEV的預(yù)防具有重要作用。
　　為檢測(cè)水貂IFN-α、IFN-β和IF

2、N-γmRNA，建立了熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法，根據(jù)GenBank設(shè)計(jì)引物，通過(guò)RT-PCR擴(kuò)增IFN-α、IFN-β、IFN-γ和GAPDH基因片段，連接到pMD18-T載體中制備質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品，建立了相應(yīng)基因mRNA的熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法并建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明：GAPDH、IFN-α和 IFN-β和 IFN-γ基因的 Ct值與標(biāo)準(zhǔn)品稀釋度在1×101copies/μL～1×107copies/μL內(nèi)均呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)

3、系數(shù)（R2）均為1.00，熔解曲線均呈單一熔解峰，檢測(cè)下限為10copies/μL，重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果表明組內(nèi)、組間變異系數(shù)均小于4.5％。臨床樣品檢測(cè)結(jié)果表明水貂感染腸炎病毒后，IFN-α、IFN-β和IFNγ相對(duì)表達(dá)水平均在6d達(dá)到最高峰值，IFN-α相對(duì)表達(dá)量要比IFN-β和IFN-γ相對(duì)表達(dá)量高，并且在感染期（4d～6d）IFN-α相對(duì)表達(dá)量明顯上調(diào)。本研究為水貂IFN mRNA的定量分析提供了有效工具。
　　為研究水貂腸炎病

4、毒強(qiáng)毒株SMPV-11和弱毒疫苗株MEVB-F61分別感染水貂后，水貂細(xì)胞因子的動(dòng)態(tài)變化，現(xiàn)采用已建立并應(yīng)用的SYBR GreenⅠ染料法熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法，檢測(cè)不同MEV（SMPV-11和MEVB-F61）感染水貂后，水貂細(xì)胞因子的動(dòng)態(tài)變化。檢測(cè)結(jié)果表明：在感染SMPV-11和MEVB-F61病毒后，IFN-α、IFN-β、INF-γ和IL-4相對(duì)表達(dá)量在2d～6d逐漸升高，并且在第6d達(dá)到峰值；并且IFN-α、IFN-β、

5、INF-γ和IL-4在10d和15d SMPV-11組的表達(dá)量均高于MEVB-F61組；TNF-α的相對(duì)表達(dá)量與前三者有所差異，在0d～2d mRNA表達(dá)量逐漸升高，第2d達(dá)到最高值后逐漸下降，在第6d又開始逐漸升高，并且SMPV-11組的表達(dá)量也高于MEVB-F61組。本研究為MEV感染水貂后機(jī)體外周血細(xì)胞因子動(dòng)態(tài)變化的研究提供理論基礎(chǔ)。
　　為了研究水貂腸炎病毒感染水貂后病毒在水貂體內(nèi)的分布情況，設(shè)計(jì)了兩個(gè)試驗(yàn)，首先研究水貂細(xì)

6、小病毒強(qiáng)毒株SMPV-11口服感染水貂后的病理變化、白細(xì)胞變化和病毒在體內(nèi)不同器官分布情況等；同時(shí)另一個(gè)試驗(yàn)研究了弱毒疫苗株MEVB-F61注射感染水貂后的病毒在體內(nèi)不同器官分布規(guī)律、白細(xì)胞變化。結(jié)果表明，SMPV-11感染后，水貂表現(xiàn)出嚴(yán)重的臨床特征，如食欲廢絕、體溫升高及血便等癥狀，剖檢可見(jiàn)腸系膜淋巴結(jié)、脾臟和肝臟腫大有出血點(diǎn)、腸道出血和腸壁變薄等癥狀，感染24h后，在各組織臟器中可以檢測(cè)到病毒，并且在4d～6d MEV載量維持較高

7、水平。MEVB-F61感染后，未發(fā)現(xiàn)主要的臨床癥狀，剖檢未見(jiàn)明顯的病理變化特征，病毒載量檢測(cè)顯示，在腦、腎臟和肺臟中未檢測(cè)到MEV的存在，而且在其它組織中，病毒載量均較低，在第15d心、肝和腸道等臟器中已檢測(cè)不到MEV。在4d～8d是SMPV-11組和MEVB-F61水貂的排毒量高峰時(shí)段，表明此時(shí)段是病毒向外界擴(kuò)散最嚴(yán)重時(shí)期，并且兩個(gè)毒株在腸道和淋巴組織和脾臟中含量最高，印證了腸道、腸系膜淋巴結(jié)和脾臟等是MEV主要的靶器官。對(duì)MEV在臨