泰索帝對(duì)人鼻咽癌細(xì)胞系CNE-1放射增敏作用機(jī)理的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文泰索帝對(duì)人鼻咽癌細(xì)胞系CNE-1放射增敏作用機(jī)理的實(shí)驗(yàn)研究姓名：顧菲申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：李光200304011 2 h ，再次換新鮮培養(yǎng)液( 4 m 1 ) ，然后立即進(jìn)行單次照射2G y ；( 4 ) 泰索帝加照射組：加入含泰索帝( 5 X 1 0 4 m e ／m 1 ) 的培養(yǎng)液( 4 r a l ) 作用1 2 h 后棄去禽藥培養(yǎng)波，用P B S 液清洗2 次，擻新鮮培養(yǎng)液( 4 r

2、a l ) ，隨后立即進(jìn)行單次照射2G y 。上述各組細(xì)胞經(jīng)處理后繼續(xù)培養(yǎng)0 , 6 、1 2 、1 8 、2 4 、3 6 、4 8 h ，分別胰酶消化、收獲細(xì)胞，一2 0 。C 預(yù)冷的7 0 ％乙醇4 9 C 固定至少o ．5 h 。檢測(cè)前棄乙醇，依次用0 ．1 ％T r i t o nX 一1 0 0l m l 、1 0 n , ．g ／m tR N a s e2 0 0 m 、5 0 斗∥越P I 染液1 0 0 - 越處理質(zhì)，

3、用流式細(xì)胞儀( F A C S c a n ) 激發(fā)光波長(zhǎng)4 8 8 n m 。每個(gè)樣品至少捻測(cè)1X 1 0 4 個(gè)搦腮，數(shù)據(jù)獲取用C E L L Q u e s t 軟件，分析綱胞周期用M o d F i t2 。0 軟件。4 。免疫組化染色：將蓋玻片置于6 e r a 直經(jīng)的玻璃壤養(yǎng)覡內(nèi)，每只培養(yǎng)皿內(nèi)放置兩個(gè)盞玻片。取指數(shù)生長(zhǎng)期纓胞，胰酶淡化詩數(shù)活纓胞數(shù)，按一定數(shù)量漉加單纓腿懸渡予蓋玻冀上，蓋上培養(yǎng)嘎上蓋。貼壁培養(yǎng)約半小時(shí)后，肉壤養(yǎng)

4、娌內(nèi)翔入4 m l 培養(yǎng)渡，繼續(xù)培養(yǎng)t 2 h 履去除培養(yǎng)滾。( 1 ) 對(duì)照組：加入不會(huì)藥物的囊鮮培養(yǎng)液( 4 烈) 培養(yǎng)1 2 h ；蒜次加囊鮮培券滾( 4 越) ；( 2 ) 用藥組：加入禽泰索帝( 5 ×1 0 川玨影烈) 的培養(yǎng)液( 4 m 1 )饞用1 2 h 后棄去含藥壤莠渡，用P B S 液清洗2 次，換薪鮮培養(yǎng)滾( 4 d ) ；( 3 ) 上述各組纓胞經(jīng)處理后繼續(xù)培葬4 8 h ，取出盞玻片，P B S液清

5、洗3 次( X 5 r a i n ) ，用筠％乙醇豳定1 0 r a i n ，P B S 渡濤洗3 次( x S w a n ) 。( 4 ) 將盞玻片燕予0 。l ％的T r i t o nX 一1 0 0 溶液內(nèi)浸2 0 r a i n ，P B S 渡清洗3 次( x 5 m i n ) ，以著步驟按免疫組佬試劑盒說明嚳遴符。采用s —P 法，一抗為薛甩型。兔抗久C a s p a s e —P a n 多克隆·2