新生豬胰島細(xì)胞的HLA-G1轉(zhuǎn)染及異種移植AVR的免疫活性細(xì)胞浸潤研究.pdf

1、第一部分 新生豬胰島細(xì)胞的分離純化和培養(yǎng) 目的:探討一種簡單可行、高效的新生豬胰島細(xì)胞體外分離和培養(yǎng)的方法,為進(jìn)一步胰島細(xì)胞的基因轉(zhuǎn)染創(chuàng)造條件.結(jié)論:采用低濃度的V型膠原酶分次消化,Ficoll-400密度梯度離心純化胰島細(xì)胞,可以獲得數(shù)量較多的,活力良好的新生豬胰島細(xì)胞,為進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)提供了研究材料.第二部分 新生豬胰島細(xì)胞的HLA-G<,1>轉(zhuǎn)染 目的:HLA-G基因特異性表達(dá)在胚胎絨毛外細(xì)胞滋養(yǎng)層,在維持母胎耐受方面起重要作用.H

2、LA-G<,1>基因表達(dá)NK細(xì)胞、T細(xì)胞以及樹突狀細(xì)胞的抑制性受體的配體,誘導(dǎo)移植免疫耐受.該實(shí)驗(yàn)探討脂質(zhì)體介導(dǎo)HLA-G<,1>基因轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的新生豬胰島細(xì)胞的可行性,分析其表達(dá)狀況.結(jié)論:利用脂質(zhì)體GeneJammer轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的胰島細(xì)胞,可以獲得靶基因的瞬時(shí)高效表達(dá).第三部分 轉(zhuǎn)染HLA-G<,1>的新生豬胰島細(xì)胞<'51>Cr實(shí)驗(yàn)?zāi)康?探討脂質(zhì)體介導(dǎo)的體外HLA-G<,1>基因轉(zhuǎn)染新生豬胰島細(xì)胞后,目的基因HLA-G<,1>

3、的表達(dá)對(duì)人NK細(xì)胞細(xì)胞毒的抑制作用.結(jié)論:利用脂質(zhì)體GeneJammer轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的新生豬胰島細(xì)胞,HLA-G<,1>轉(zhuǎn)染可以有效抑制人NK細(xì)胞對(duì)豬胰島細(xì)胞的細(xì)胞毒作用.第四部分 免疫活性細(xì)胞在獼猴接受異位豬心臟移植急性血管性排斥反應(yīng)中的意義 目的:探討免疫活性細(xì)胞在異種移植急性血管性排斥反應(yīng)中的意義.方法獼猴接受腹腔內(nèi)異位豬心臟移植,使用高精度的CVF完全清除獼猴體內(nèi)補(bǔ)體,獲得AVR模型.移植心遭排斥并停跳后手術(shù)切除,常規(guī)病理檢查,