神經(jīng)節(jié)苷脂抗體在相關(guān)免疫性神經(jīng)疾病發(fā)病中作用機(jī)制的研究以及IVIg對(duì)此類疾病的保護(hù)作用及評(píng)價(jià).pdf

1、格林巴利綜合征(GBS)是目前世界上由自身免疫性神經(jīng)肌肉疾病導(dǎo)致軟癱首要的病因。神經(jīng)節(jié)苷脂，一種攜帶唾液酸基的鞘糖脂，在脊椎動(dòng)物的神經(jīng)系統(tǒng)中含量豐富。拮抗神經(jīng)節(jié)苷脂的抗體與多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病有關(guān)目前，有充足的證據(jù)證明抗神經(jīng)節(jié)苷脂抗體與某些GBS的亞型有重要的關(guān)聯(lián)。但是，仍有很多與神經(jīng)節(jié)苷脂抗體在此類疾病中作用有關(guān)的重要議題有待證明。諸如，有關(guān)神經(jīng)節(jié)苷脂抗體的目標(biāo)抗原本質(zhì)問(wèn)題，提供進(jìn)一步的與補(bǔ)體作用有關(guān)的實(shí)驗(yàn)證據(jù)等。充分理解上述有關(guān)神經(jīng)節(jié)苷

2、脂抗體誘導(dǎo)損傷的分子和細(xì)胞水平的作用機(jī)制可以幫助我們更有效地開發(fā)相關(guān)的免疫療法。為達(dá)到這一目的，一個(gè)很重要的步驟就是建立一種可模擬此類損傷的體外模型。這是由于目前我們還缺乏一種穩(wěn)定而顯著的小鼠GBS動(dòng)物模型。因此，我們建立了兩種相關(guān)的體外模型：(1)抗神經(jīng)節(jié)苷脂抗體誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞毒模型，(2)一種由神經(jīng)節(jié)苷脂抗體導(dǎo)致了運(yùn)動(dòng)神經(jīng)損傷的脊髓培養(yǎng)模型。 另外，正是由于目前缺乏一種行之有效的GBS被動(dòng)免疫模型，因此有關(guān)神經(jīng)節(jié)苷脂抗體在G

3、BS中所起作用還有爭(zhēng)議。我們最近培育出一些具有相對(duì)高親和力的單克隆抗神經(jīng)節(jié)苷脂抗體。我們嘗試了通過(guò)腹腔移植分泌這些抗體的雜交瘤的方法，將抗體被動(dòng)轉(zhuǎn)移至小鼠體內(nèi)。而后，我們通過(guò)此模型研究了諸多在神經(jīng)病變產(chǎn)生過(guò)程中可能有關(guān)聯(lián)的因素。 雖然IVIg已通過(guò)臨床研究被證明為一種有效的治療急慢性免疫介導(dǎo)的神經(jīng)病變(包括格林巴利綜合征)的一線療法。但是，目前還不曾系統(tǒng)地檢驗(yàn)過(guò)不同品種，或同一品種但不同批次的IVIg，是否具有相同或相似的治療效

4、果。為了驗(yàn)證這一議題，我們利用了一種體外神經(jīng)節(jié)苷脂抗體誘導(dǎo)的細(xì)胞毒模型，分析和比較了8種品牌的IVIg，以及來(lái)自其中兩種品牌的不同批次IVIg在此模型中的保護(hù)作用。 第一部分：神經(jīng)節(jié)苷脂抗體誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞細(xì)胞毒模型，及IVIg保護(hù)作用的相關(guān)研究 目的：探討兩類與神經(jīng)節(jié)苷脂抗體所導(dǎo)致的神經(jīng)損傷相關(guān)的基本問(wèn)題：(1)有些神經(jīng)節(jié)苷脂抗體與糖蛋白有交叉反應(yīng)，因此此類抗體的目標(biāo)抗原尚待進(jìn)一步闡明。(2)雖然，目前病理學(xué)研究已提示補(bǔ)

5、體激活在GBS發(fā)病中的作用，但依舊缺乏這方面的實(shí)驗(yàn)學(xué)依據(jù)。 方法：一種建立在NG108-15和NG-CR-72細(xì)胞上的由不同抗神經(jīng)節(jié)苷脂單克隆抗體或含有抗神經(jīng)節(jié)苷脂抗體的GBS患者血清誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞細(xì)胞毒模型被在此研究中使用。另外，人靜脈免疫球蛋白(HumanIntravenous Immunoglobulin，IVIg)也被用于此模型來(lái)檢驗(yàn)其可能存在的保護(hù)作用。 結(jié)果：(1)無(wú)論是抗神經(jīng)節(jié)苷脂單克隆抗體，還是含有神經(jīng)節(jié)

6、苷脂抗體的GBS壽人血清，均可通過(guò)細(xì)胞表面相應(yīng)的特異神經(jīng)節(jié)苷脂而導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞溶解；(2)這類細(xì)胞溶解還是補(bǔ)體依賴性的。此外，在本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭?，GD1a的膜聚集區(qū)較GM1的聚集區(qū)對(duì)特異性神經(jīng)節(jié)苷脂抗體誘導(dǎo)的損傷具有更高的敏感性。(3)IVIg可有效地抑制此模型中由神經(jīng)節(jié)苷脂抗體誘導(dǎo)的細(xì)胞毒作用。IVIg在此模型中的保護(hù)作用機(jī)制可歸結(jié)于：抗個(gè)體基因型抗體作用，以及其對(duì)補(bǔ)體激活的抑制作用。 結(jié)論：此實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ鸵虼丝杀粦?yīng)用于鑒別由免疫介導(dǎo)的

7、神經(jīng)疾病患者體內(nèi)的致病神經(jīng)節(jié)苷酯抗體，同時(shí)還可被用來(lái)篩選新的或?qū)嶒?yàn)性的用于防治神經(jīng)節(jié)苷酯抗體誘導(dǎo)神經(jīng)損傷的治療方法。 第二部分：神經(jīng)節(jié)苷脂抗體分泌型雜交瘤導(dǎo)致的小鼠神經(jīng)病變 目的：目前由于缺乏被動(dòng)免疫動(dòng)物模型，對(duì)于神經(jīng)節(jié)苷脂抗體在GBS發(fā)病中所起的作用仍存在爭(zhēng)議。因此，本研究具體探討了可影響神經(jīng)節(jié)苷脂抗體對(duì)神經(jīng)損傷的一些因素，并希望進(jìn)而對(duì)以后成功開發(fā)出被動(dòng)免疫動(dòng)物模型起到拋磚引玉的作用。 方法：我們?cè)谝酝难芯恐?/p>

8、培養(yǎng)出多種單克隆神經(jīng)節(jié)苷脂抗體。某些此類抗體被通過(guò)腹腔神經(jīng)節(jié)苷脂抗體分泌型雜交瘤移植術(shù)，或系統(tǒng)性全身施藥法而被動(dòng)轉(zhuǎn)移到小鼠體內(nèi)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，上述動(dòng)物接受了系統(tǒng)地病理學(xué)檢驗(yàn)，以觀察其神經(jīng)損傷狀況。同時(shí)，比較了兩組間血-神經(jīng)屏障通透性的差異。 結(jié)果：大約一半接受腹腔雜交瘤移植術(shù)的小鼠出現(xiàn)了影響到部分神經(jīng)纖維的，散在的軸索病變。與之形成對(duì)比的是，被動(dòng)系統(tǒng)性地接受抗神經(jīng)節(jié)苷脂抗體的動(dòng)物，盡管血循環(huán)中抗體滴度很高，但并未發(fā)生神經(jīng)纖維退變．

9、通過(guò)對(duì)血-神經(jīng)屏障通透性的研究發(fā)現(xiàn)，接受腹腔雜交瘤移植術(shù)的動(dòng)物有著較高的血．神經(jīng)屏障通透性。 結(jié)論：我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明神經(jīng)病變的形成除了需要循環(huán)中的致病抗體外，其他諸如，抗體的可達(dá)性及神經(jīng)纖維對(duì)抗體介導(dǎo)損傷的耐受性等因素均可發(fā)揮作用。 第三部分：一種具有高親和力單克隆抗體導(dǎo)致的體外運(yùn)動(dòng)神經(jīng)退行性病變 目的：評(píng)估神經(jīng)節(jié)苷脂抗體對(duì)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)損傷的作用。 方法：近期我們培養(yǎng)出兩種含有高親和性的抗GDla的單克隆抗

10、體，這兩種抗體對(duì)大鼠脊髓體外培養(yǎng)中運(yùn)動(dòng)神經(jīng)的損傷被在此研究中得以評(píng)估。 結(jié)果：一種具有補(bǔ)體激活能力的抗GDla 單克隆抗體不僅導(dǎo)致脊髓體外培養(yǎng)中運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元數(shù)目的明顯下降，并引起運(yùn)動(dòng)神經(jīng)纖維Wallerian變性。與此同時(shí)，抗體亞型匹配的對(duì)照抗體及拮抗GDla的非補(bǔ)體激活性抗體均不能造成明顯的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)病變。 結(jié)論：本研究證實(shí)此體外脊髓培養(yǎng)模型對(duì)研究運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元及神經(jīng)纖維的免疫性損傷是非常有意義的。抗神經(jīng)節(jié)苷脂抗體對(duì)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)體

11、外損傷的發(fā)現(xiàn)有力地支持了神經(jīng)節(jié)苷脂抗體在GBS運(yùn)動(dòng)軸索亞型發(fā)病過(guò)程中起到重要作用的這一理念。 第四部分：多種IVIg 在一種體外免疫神經(jīng)疾病模型中的評(píng)估 目的：分析和比較不同品牌及不同批號(hào)的靜脈免疫球蛋白IVIg的保護(hù)作用。 方法：我們利用了一種免疫神經(jīng)疾病的細(xì)胞模型，由神經(jīng)節(jié)苷脂抗體誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞(NG108-15)細(xì)胞毒模型，分析比較了八種經(jīng)FDA批準(zhǔn)的可在美國(guó)使用的不同品牌，以及其中兩種品牌不同批號(hào)的IVI