低氧感應(yīng)、信息傳遞與鉀離子通道在低氧性肺血管收縮中的作用.pdf

1、本研究包括三部分，第一部分大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞鉀通道的電生理學(xué)特性，利用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)對(duì)大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞鉀通道的電生理學(xué)特性進(jìn)行了研究。結(jié)果表明在一定的實(shí)驗(yàn)條件下可記錄出鈣激活性鉀電流(Kca)和電壓門控性鉀電流(Kv)。Kca可被四乙胺阻斷，Kv電流由快速失活K+電流(Ka)、緩慢失活鉀電流(Kst)和延遲整流K+電流(KDR)以不同比例整合而成，該電流可被四氨基吡啶所阻斷，據(jù)其尾電流得出的電流-電壓曲線呈S形，通過即刻電流可推

2、斷出鉀離子的平衡電位為-72mv。 第二部分CoCl2抑制大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞電壓門控性鉀離子通道活性的研究，研究CoCl2對(duì)急性分離的大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(PaSMCs)電壓依賴性鉀離子通道(Kv)的影響。方法：采用急性酶分離法分離出大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞，然后利用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄PaSMCs的Kv通道的電流特性；將4-AP加到細(xì)胞浴液中，可觀察到Kv電流受到明顯抑制，記錄4-AP作用前后Kv通道的電流變化；再用不同濃度的C

3、oCl2作用于PaSMCs，記錄加藥前后的電流變化。結(jié)果：CoCl2對(duì)Kv有明顯的抑制作用，并且具有一定的濃度依賴性，在加用Kv的特異性的阻斷劑4-AP后再加用CoCl2不能進(jìn)一步抑制Kv電流。結(jié)論結(jié)果表明4-AP和CoCl2均可作用于Kv通道的同一部位。CoCl2可取代血紅素蛋白中央Fe2+,而Co2+與O2的親合力較Fe低，從而抑制了細(xì)胞內(nèi)多種血紅素蛋白的功能，使血紅素蛋白成缺氧構(gòu)型，模擬了低氧狀態(tài)，低氧的信號(hào)傳遞給Kv通道后，使K

4、v電流受抑制，引起平滑肌細(xì)胞收縮。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)PaSMCs的氧感受器為一種血紅素蛋白的結(jié)論。 第三部分細(xì)胞色素P450氧化酶與低氧感受的關(guān)系的研究，探討細(xì)胞色素P450氧化酶阻斷劑clotrimazole、miconazole及1-aminobenzotriazole對(duì)急性分離的大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(PaSMCs)電壓依賴性鉀離子通道(Kv)的影響。方法：采用急性酶分離法分離出大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞，然后利用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記

5、錄PaSMCs的Kv通道的電流特性；將4-AP加到細(xì)胞浴液中，可見到Kv電流受到明顯抑制，記錄4-AP作用前后Kv通道的電流變化；接著用不同濃度的clotrimazole、miconazole及1-aminobenzotriazole(1-ABT)作用于PaSMCs，記錄加藥前后的電流變化。結(jié)果：以上3種藥物對(duì)Kv有明顯的抑制作用，具有一定的濃度依賴性，在加用Kv的特異性的阻斷劑4-AP后再加用以上3種藥物不能進(jìn)一步抑制Kv電流。結(jié)論這