枸杞多糖對P-糖蛋白影響的研究.pdf

1、一、目的
　　 研究枸杞多糖對P-糖蛋白功能及表達的影響，以及枸杞多糖對P-糖蛋白底物羅丹明-123在Caco-2細胞單層模型上雙向轉(zhuǎn)運的影響。
　　 二、方法
　　 1、細胞培養(yǎng)及毒性試驗
　　 細胞免疫熒光法進行P-糖蛋白表達驗證。
　　 用MTT法分別考察枸杞多糖、環(huán)孢素A和維拉帕米對Caco-2細胞及ECV304細胞的毒性。
　　 2、枸杞多糖對P-糖蛋白功能的影響
　　

2、考察枸杞多糖對羅丹明-123外排的影響，從而確定枸杞多糖對P-糖蛋白功能的影響。
　　 3、枸杞多糖對P-糖蛋白表達量的影響
　　 考察枸杞多糖對P-糖蛋白表達的影響，從而確定枸杞多糖對P-糖蛋白表達的影響
　　 4、枸杞多糖對羅丹明-123轉(zhuǎn)運的影響
　　 首先在建立Caco-2細胞單層模型考察枸杞多糖對羅丹明-123跨細胞膜轉(zhuǎn)運功能的影響。
　　 三、結果
　　 1、細胞培養(yǎng)及細胞毒性

3、實驗
　　 Caco-2細胞和ECV304細胞形態(tài)正常，生長旺盛，Caco-2細胞高表達P-糖蛋白，ECV304低表達P-糖蛋白。
　　 MTT結果顯示，枸杞多糖、維拉帕米和環(huán)孢素A分別在10-150μg/mL、0.01-100μmol/L和0.01-10μmol/L范圍內(nèi)對Caco-2細胞為非細胞毒性劑量。
　　 2、枸杞多糖對P-糖蛋白功能的影響
　　 枸杞多糖各濃度組對P-糖蛋白的功能有一定的抑制作

4、用。
　　 3、枸杞多糖對P-糖蛋白表達的影響
　　 枸杞多糖在一定濃度范圍內(nèi)能顯著上調(diào)P-糖蛋白的表達水平，結果與功能實驗結果相反。
　　 4、枸杞多糖對羅丹明-123轉(zhuǎn)運的影響
　　 枸杞多糖對羅丹明-123的外排轉(zhuǎn)運表現(xiàn)出抑制作用，與功能結果同為抑制作用。
　　 四、結論
　　 1、枸杞多糖對P-糖蛋白具有瞬時抑制功能和72小時的表達上調(diào)作用，因此，枸杞多糖對P-糖蛋白的作用的最終結