PRDM1基因在惡性淋巴瘤中的表達(dá)及其臨床意義.pdf

1、第一部分 PRDM1 基因在彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤中的表達(dá)及其臨床意義 陽性調(diào)控區(qū)Ⅰ (PRDMl)基因是位于6號(hào)染色體長臂的轉(zhuǎn)錄抑制因子,它編碼的B淋巴細(xì)胞成熟蛋白1(Blimp-1)是成熟B細(xì)胞向漿細(xì)胞分化的管家調(diào)控子,除本身具有組蛋白甲基化酶的功能,同時(shí)還可以募集hGroucho、G9a和組蛋白去乙酰化酶行使和加強(qiáng)其組蛋白修飾功能,調(diào)控一系列與B細(xì)胞終末分化有關(guān)的基因,最終目的是使處于增殖周期的B細(xì)胞停止增殖,做好向漿細(xì)胞分

2、化的準(zhǔn)備.PRDM1屬于抑癌基因范疇,有兩種異構(gòu)型,即PRDM1α和PRDM1β,并受NFкB調(diào)控.PRDM1 α結(jié)構(gòu)功能正常,發(fā)揮正常生理功能,而PRDM1β是一種截短型異構(gòu)體,與腫瘤的發(fā)生相關(guān).近期研究證實(shí)PRDM1蛋白表達(dá)于侵襲性較強(qiáng)的一組彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤中,但與侵襲性相關(guān)的內(nèi)在機(jī)制未見報(bào)道.R-CHOP方案已證實(shí)能夠改善高侵襲性彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤患者的預(yù)后,機(jī)制之一是美羅華通過CD20受體抑制了NF к B傳導(dǎo)通路,誘導(dǎo)細(xì)

3、胞凋亡或增加耐藥細(xì)胞的敏感性.許多研究證實(shí)多種因素引起的NF K B組成性激活是腫瘤細(xì)胞耐藥的重要機(jī)制.本研究探討PRDMlα和PRDMlβ在彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤中的表達(dá)以及與分型和臨床療效的關(guān)系;探討PRDMl與高侵襲性彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤相關(guān)的內(nèi)在機(jī)制及克服PRDMl相關(guān)耐藥的途徑.選擇彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤患者82例,免疫組織化學(xué)方法通過檢測CD10、BCL6、IRF4將其分為生發(fā)中心和非生發(fā)中心兩種亞型.顯微切割聯(lián)合RT-PCR以

4、及免疫組織化學(xué)方法檢測患者中PRDMl α和β基因及PRDMl蛋白表達(dá);體外實(shí)驗(yàn)選擇B淋巴瘤Namalwa細(xì)胞株,RT-PCR和Western Blotting方法觀察阿霉素和美羅華單獨(dú)或聯(lián)合給藥對(duì)PRDMl影響,EUSA方法檢測對(duì)NF K B活性的影響,同時(shí)觀察NF KB抑制劑PDTC對(duì)PRDMl的作用.結(jié)果發(fā)現(xiàn)PRDMlα和PRDMl β轉(zhuǎn)錄本僅表達(dá)于彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤非生發(fā)中心亞型的腫瘤細(xì)胞,而PRDMlβ在CHOP方案治療的非

5、生發(fā)中心型患者中與短生存期相關(guān),但在R-CHOP方案治療組中未顯示相關(guān)性;盡管PRDMl蛋白表達(dá)在生發(fā)中心型(13/33,39.4﹪)和非生發(fā)中心型(24/49,49.0﹪)之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但表達(dá)PRDMl β轉(zhuǎn)錄本的非生發(fā)中心型病人均檢測出PRDMl蛋白表達(dá),且淋巴瘤細(xì)胞中PRDMl與IRF4表達(dá)顯著相關(guān).體外實(shí)驗(yàn)中,耐藥的Narealwa細(xì)胞也表達(dá)PRDMlβ,美羅華能夠抑制PRDMlβ表達(dá),同時(shí)伴隨NF-KB活性的降低.NFKB

6、抑制劑PDTC在抑制細(xì)胞株生長同時(shí)也抑制PRDMlβ。PRDMlβ在彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤非生發(fā)中心亞型中可能成為一個(gè)新的預(yù)后標(biāo)志;與腫瘤發(fā)生有關(guān)的PRDM1β與IRF4共同表達(dá)可能是彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤高侵襲性的一種原因;降解PRDM1β可能是美羅華對(duì)彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤增效的生物學(xué)機(jī)制之一;通過檢測NE-κB活性可能預(yù)測對(duì)美羅華治療有效的B細(xì)胞淋巴瘤患者. 第二部分PRDMl基因在T細(xì)胞淋巴瘤中的表達(dá)及其臨床意義 既往

7、研究證實(shí)PRDMl基因編碼的蛋白是B淋巴細(xì)胞向漿細(xì)胞分化的管家調(diào)控子.近期有研究發(fā)現(xiàn)PRDMl的作用并不局限在調(diào)控B淋巴細(xì)胞的分化,它在T淋巴細(xì)胞的穩(wěn)態(tài)和活化中也起重要作用.T細(xì)胞淋巴瘤發(fā)病的重要機(jī)制之一是與染色質(zhì)重構(gòu)有關(guān)基因發(fā)生異常.為研究PRDMl在T細(xì)胞淋巴瘤中的表達(dá)以及與發(fā)病機(jī)制和預(yù)后的關(guān)系,我們選擇47例T細(xì)胞淋巴瘤患者,采用顯微切割聯(lián)合RT-PCR和免疫組織化學(xué)的方法檢測PRDM1基因和蛋白在其中的表達(dá)情況.PRDM1轉(zhuǎn)錄本

8、有Q和J3兩種異構(gòu)體,PRDM1α編碼正常功能的蛋白,PRDM1β編碼一個(gè)缺失SET功能區(qū)的截短型蛋白,與腫瘤的發(fā)生相關(guān).研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)48.9﹪(23/47例)患者檢測出PRDM1α Mrna,25.5﹪(12/47例)患者檢測出PRDM1β Mrna,31.9﹪(15/47)患者表達(dá)PRDM1蛋白,PRDM1主要分布在胸腺后細(xì)胞來源的 T 細(xì)胞淋巴瘤患者;同時(shí)檢測PRDM1與轉(zhuǎn)錄因子IRF4和C-myc表達(dá)的關(guān)系,發(fā)現(xiàn)PRDM1表達(dá)與

9、IRF4表達(dá)顯著相關(guān),也主要分布于胸腺后細(xì)胞來源的T細(xì)胞淋巴瘤.c-myc在胸腺細(xì)胞來源和胸腺后細(xì)胞來源的T細(xì)胞淋巴瘤中均有表達(dá),而且PRDM1β Mrna與c-myc的高表達(dá)有關(guān).對(duì)患者的臨床資料分析發(fā)現(xiàn)PRDM1β陽性的患者顯示進(jìn)展的臨床分期、升高的LDH、IPI評(píng)分高危.用耐藥的 T 淋巴瘤細(xì)胞株 HUT78 進(jìn)行體外研究發(fā)現(xiàn),常用的細(xì)胞毒藥物阿霉素不能下調(diào)PRDM1 β、IRF4和 c-myc 表達(dá),但新型抗腫瘤藥物蛋白酶體抑制

10、劑'Velcade聯(lián)合阿霉素能夠下調(diào) PRDM1 β、IRF4和 c-myc 表達(dá),較阿霉素顯著增加了對(duì)HUT78的生長抑制率.研究發(fā)現(xiàn)PRDM1 β的下調(diào)與NF к B活性的抑制密切相關(guān),Velcade可以減少細(xì)胞核內(nèi)的NF к B,PRDM1 β隨之減少.而阿霉素不減少細(xì)胞核內(nèi)的NF к B,PRDM1 β也未發(fā)生改變.另一種NF к B抑制劑PDTC也可以減少PRDM1 β的表達(dá).研究表明PRDM1和IRF4可能同時(shí)表達(dá)在一組激活