益氣活血中藥復方通脈口服液干預DN的療效觀察及腎保護作用研究.pdf

1、目的： 探討益氣活血中藥復方通脈口服液干預糖尿病腎病的療效及腎保護作用。 方法： 一、臨床部分： 病例來源：廣東省中醫(yī)院本部及二沙、芳村分院的住院及門診病人。 診斷標準： ①西醫(yī)診斷標準： (1)糖尿病診斷標準：參照1999年WHO標準。 (2)糖尿病腎病分期標準：參照 Mogensen 標準及王海燕《腎臟病學》。 ②中醫(yī)證型診斷標準： 參照2002年版《中

2、藥新藥臨床研究指導原則》中關于氣虛證及血瘀證的辨證標準。 ③癥狀積分標準： 癥狀按無、輕、中、重記0、1、2、3分，舌脈記“有”為1 分，“無”為0分。 監(jiān)測項目：每二周監(jiān)測癥狀、舌脈、血壓、餐后 2h 毛細血管全血血糖，試驗前后各監(jiān)測尿24h尿蛋白定量，血清尿素氮 (BUN)、血肌酐(SCr)、總膽固醇(TCh)、甘油三酯(TG)。 療程：8周。 治療方案： ①基礎治療： (1)

3、糖尿病健康教育、體育鍛煉及低鹽優(yōu)質蛋白糖尿病飲食：每日食鹽攝入量≤6克，精蛋白攝入量：0.8g/Kg·d； (12)控制血壓：目標：<130/80mmHg；可應用非ACEI及ARB 外的所有降壓藥； (3)控制血糖：目標：FPG≤7.0mmol/L 2HPG≤10.0mmol/L 全部應用糖適平和/或胰島素治療； (4)對癥處理。 ②分組治療： (1)T組：通脈口服液：1支/次，3次/日，口服；

4、 (2)L組：洛汀新片：10mg/次，1次/日，口服。 調查方法： ①藥物洗脫：共2周，停用所有ACEI、ARB、益氣活血類中藥等制劑：給予受試者DM 教育，低鹽低脂優(yōu)質低蛋白飲食；血壓控制于<130/80mmHg 水平；血糖控制在FPG≤7/0mmol/L，2HPG≤10.0mmol/L 水平；血脂控制在 TCH≤5.98mmol/L，TG≤1.7mmol/L 水平。結束復查 24h 尿蛋白定量； ②分組

5、：將合格病例分為洛汀新組(L組)及通脈組(T組)； ③試驗過程依從性：采用藥物記量的方法了解患者依從性。研究者應耐心向患者做好解釋工作，提前電話通知，使其充分理解，配合研究。免除掛號費以保證按期就診率。 ④干擾和沾染的控制：所有病人受試期間不得接受試驗措施以外的相關藥物或治療，盡量保證病人按照治療方案規(guī)定用藥，而不受其他藥物等治療措施的影響。 二、實驗部分： 實驗一：通脈口服液對實驗性糖尿病模型大鼠腎臟保

6、護作用的研究選鼠分組：選用SD雄性大鼠，設立正常對照組(C組)；余動物采用STZ單次腹腔注射方法制備糖尿病(DM)動物模型，DM大鼠模型成功后隨機分為模型組(M組)、通脈組(T組)及洛汀新組(L組)。 干預起始點：DM 模型成功，分組后即開始干預。 干預方式：①飼料：T、L、M 組給予隔日高脂飼料，C 組給予普通飼料；實驗期間均自由進食和飲水；②藥物：T組給予通脈口服液灌胃，L組給予洛汀新灌胃，c及M組給予生理鹽水灌胃。

7、 干預時限：6周。 大鼠淘汰標準：①干預過程中，測定血糖值<16.8mmol/L 者，予以淘汰；②6周后處死大鼠，光鏡示腎組織無明顯病變者，予以淘汰。 觀察項目：大鼠一般情況、體重、尿量、24h 尿蛋白定量、總膽固醇 (TCh)、甘油三脂(TG)、血糖(BG)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、腎重/體重比值(K/W)；光鏡、電鏡下進行腎臟組織病理形態(tài)學觀察。 實驗二：通脈口服液對實驗性糖尿病腎病模型

8、大鼠的腎臟保護作用研究選鼠、C組設立、DM 動物模型制備：同實驗一。 DN 模型制備及分組：DM 大鼠模型成功后，給予隔日高脂飼料飼養(yǎng)4周， DN大鼠模型成功，隨機分為M組、T組及L組。 干預起始點：DN模型成功，分組后即開始干預。 干預方式、干預時限、大鼠淘汰標準：同實驗一。 觀察項目：測量腎小球截面積(MGA)、細胞外基質截面積(MMA)、腎小球基底膜厚度(GBM)，計算細胞外基質截面積/腎小球截面積

9、(MMA/MGA)比值； 余項目同實驗一。 實驗三：通脈口服液對實驗性糖尿病腎病模型大鼠腎組織MMP-9及其作用底物、調控因子表達影響的研究標本來源：選擇實驗二干預后C組、M組、T 組大鼠腎組織，每組隨機選擇6例標本。 實驗方法：免疫組化法。 觀察項目：測定腎組織 Col-Ⅳ、MMP-9、TIMP-1、TGF-β<,1>等的免疫組化染色面積、面密度及積分光密度，計算 MMP-9/TIMP-1 免疫組化染色

10、面積比值。 結果： 一、臨床部分： ①療程前兩組患者一般情況、24h 尿蛋白定量、腎功能等，差異無統計學意義(P>0.05)；療程中，兩組患者血壓、血糖、血脂等差異無統計學意義(P>0.05)； ②療程后T組DN患者24h 尿蛋白定量、癥狀積分較治療前明顯降低，差異有顯著性統計學意義 (P(0.01)； ③療程后T組與L 組比較：24h 尿蛋白定量前后差值，差異無統計學意義(P>0.05)，T 組

11、癥狀積分前后差值高于L組，差異有顯著性統計學意義(P(0.01)。 二、實驗部分： 實驗一：通脈口服液對實驗性糖尿病模型大鼠腎臟保護作用的研究體重、尿量： ①T、L、M三組較C組大鼠尿量增加，體重降低，差異有顯著性統計學意義(P<0.01)； ②T組大鼠尿量較L、M組有減少的趨勢，體重較L、M組有增加的趨勢，但T、L、M三組間尿量及體重差異無統計學意義(P>0.05)。 24h 尿蛋白定量：

12、 ①T、L、M三組 24h 尿蛋白定量較C組升高，差異有顯著性統計學意義(P>0.01)； ②T組24h尿蛋白定量較M組降低，差異有顯著性統計學意義(P<0.01)；與L組比較差異無統計學意義(P>0.05)。 血糖： ①T、L、M三組與C組比較血糖持續(xù)升高，差異有顯著性統計學意義 (P<0.01)； ②T、L、M三組組間血糖比較差異無統計學意義(P>0.05)。 血尿素氮、肌酐： C、

13、T、L、M 四組組間比較差異無統計學意義(P>0.05)。 總膽固醇、甘油三脂： ①T、L、M 三組 TCh、TG較C組均升高，差異有顯著性統計學意義(P(0.01)； ②T組 TCh、TG 較M組、L 組均降低，差異有統計學意義(P<0.05或P<0.01)。腎重/體重比值； 腎組織病理形態(tài)學： ①M組。腎小球肥大、系膜區(qū)增寬等病變較C組明顯加重； ②T組腎小球肥大、系膜區(qū)增寬等病變較M

14、組減輕，和L組無明顯差異。 實驗二：通脈口服液對實驗性糖尿病腎病模型大鼠的腎臟保護作用研究體重、尿量： T組大鼠尿量較M組、L組明顯減少，體重較M組、L組增加，差異有統計學意義(P<0.01或P<0.05)。 尿素氮： T組較M組、L組均降低，差異有統計學意義(P<0.01或P<0.05)。 24h 尿蛋白定量、總膽固醇、甘油三脂、血糖、血肌酐、腎重/體重比值：結果同實驗一。 腎組織病理形

15、態(tài)學： ①M組系膜區(qū)增寬、基底膜增厚及腎小管上皮細胞空泡變性等，較C組明顯加重； ②T組系膜區(qū)增寬、基底膜增厚及腎小管上皮細胞空泡變性等，較M組明顯減輕，和L組無明顯差異。 ①M組 MMA/MGA 比值較C組增加，差異有顯著性統計學意義 (P<0.01)； ②T組MMA/MGA 比值較M組、L 組降低，差異有統計學意義(P<0.01或．P<0.05)。 腎小球基底膜厚度： ①M組GBM較C

16、組增厚，差異有顯著性統計學意義(P<0.01)； ②T組GBM較M組變薄，差異有顯著性統計學意義(P<0.01)，與L組比較差異無統計學意義(P>0.05)。 實驗三：通脈口服液對實驗性糖尿病腎病模型大鼠腎組織MMP-9及其作用底物、調控因子表達影響的研究Ⅳ型膠原：主要表達定位于腎小球，和C組比較，M組呈強陽性表達；T組免疫組化染色面密度及積分光密度均較M組降低，差異有顯著性，差異有顯著性統計學意義(P<0.01)：

17、 結論： 1．益氣活血中藥復方通脈口服液臨床觀察，結果顯示：該中藥可以有效改善DN患者的臨床癥狀，減輕尿蛋白，保護腎功能：動物實驗結果顯示：該中藥可以有效減輕實驗性DN模型大鼠尿蛋白、調節(jié)血脂及改善腎臟病理損害。 2．益氣活血中藥復方通脈口服液對DN腎臟保護作用的機制可能是：改善脂質代謝，減輕尿蛋白，抑制腎組織TGF-β<,1>表達，調節(jié)MMP-9/TIMP-1 比例失衡，增加Ⅳ型膠原降解，減輕ECM積聚，改善腎臟肥