超聲造影診斷肝動脈狹窄的實驗研究.pdf

1、目的與意義: 肝動脈狹窄是肝移植術(shù)后的常見并發(fā)癥，臨床發(fā)生率較高，是導(dǎo)致移植失敗乃至受體死亡的主要原因之一，肝動脈的通暢性對于移植術(shù)后膽道系統(tǒng)的血供也具有重要意義，因此對移植術(shù)后肝動脈并發(fā)癥的監(jiān)測極為關(guān)鍵。X線血管造影是目前診斷肝動脈狹窄的金標(biāo)準，但術(shù)后并發(fā)癥多、造影劑腎毒性大以及費用昂貴等因素限制了其在臨床的廣泛應(yīng)用。其他評價方法如：CT、MRI成像、放射性核素掃描等也存在著儀器要求高、不能床邊、不便重復(fù)以及放射示蹤劑缺乏穩(wěn)定

2、性和具有放射污染等無法克服的缺點。彩色多普勒超聲以其簡便、無創(chuàng)、可床邊重復(fù)檢查等優(yōu)點，成為檢測肝移植術(shù)后肝動脈狹窄的首選影像學(xué)方法，但與超聲造影相比，易受彩色外溢、運動噪音干擾等多種因素的影響準確性相對較低。超聲造影是一門用于評價實質(zhì)性臟器血流灌注的新興技術(shù)，它應(yīng)用微氣泡作為示蹤劑，在超聲條件下觀察組織的血流灌注情況，另外，超聲造影及相關(guān)造影顯像技術(shù)的發(fā)展，集合了所有無創(chuàng)性影像診斷的功能，使組織顯像達到了微小血管血流灌注的水平，避免了C

3、DFI內(nèi)在的不足，可較準確的顯示移植術(shù)后肝動脈狹窄并判斷其狹窄程度，有利于提高肝移植術(shù)后肝動脈并發(fā)癥診斷的準確性。本研究聯(lián)合應(yīng)用新近發(fā)展起來的聲學(xué)密度定量技術(shù)，探討超聲造影定量分析技術(shù)診斷肝動脈狹窄的可行性，以尋找更簡便、準確、安全而又無創(chuàng)的診斷方法，為移植后肝動脈狹窄的診斷奠定基礎(chǔ)。 資料與方法: 1.實驗動物 健康雜種犬10只，雌雄不限，體重15-20kg(南方醫(yī)院實驗動物中心提供)。 2.儀器設(shè)備

4、 超聲造影儀器選用Philipsiu22彩超儀，內(nèi)置聲學(xué)密度分析軟件QLAB，探頭型號C5-2(頻率2.0～5.0MHz)及L9-3(頻率3.0～9.0MHz)，選用脈沖反向諧波造影技術(shù)。儀器其它設(shè)置(增益、掃描深度等)在造影前后保持不變，所有實驗應(yīng)用相同設(shè)置。 X線血管造影儀器選用SIEMENSAXIOM1conosR200FL-Ccm。 3.造影劑 采用南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院藥理基地提供的白蛋白包裹全氟丙

5、烷微氣泡聲學(xué)造影劑“全氟顯”，微泡直徑2.0～5.0μm，濃度1.0×109～2.0×109／ml，分布90％<10.0μm，pH值6.4～7.4。 4.實驗方法 4.1手術(shù)室準備：每只實驗犬用3％鹽酸戊巴比妥按30mg／kg行靜脈麻醉后常規(guī)胸腹部備皮，實驗過程中以3％鹽酸戊巴比妥靜注維持麻醉狀態(tài)；分離左側(cè)股靜脈，建立靜脈通道，接三通管用于輸注造影劑、液體和藥物，并以生理鹽水維持體液平衡。分離右側(cè)股動脈用于X線血管造影插

6、管；取腹部正中切口暴露肝臟及肝動脈，并游離肝動脈根部。 4.2肝動脈狹窄模型制備：手術(shù)絲線繞過犬肝動脈主干，其兩端穿入自制硅膠管，出口處使用血管鉗將其夾住，通過拉緊絲線壓迫血管壁的方法建立肝動脈狹窄模型，并通過收放血管鉗的力度來調(diào)解肝動脈的狹窄程度，具體數(shù)值經(jīng)游標(biāo)卡尺測量肝動脈外徑同時使用二維超聲測量其橫截面積的方法計算得出，實驗中每條犬均依次按照正常，50％，70％，90％，100％的狹窄程度順序進行。 4.3X線血管

7、造影：在X線透視引導(dǎo)下，將介入導(dǎo)管由股動脈插入，經(jīng)腹主動脈送至肝動脈主干，注入20％泛影葡胺5ml，同時開啟X線血管造影儀證實狹窄程度。 4.4CDFI檢查：觀察犬肝動脈有無血流顯示，并檢測其血流峰值(Vp)、加速度時間(SAT)和阻力指數(shù)(RI)。 4.5超聲造影檢查：由股靜脈彈丸式注入造影劑(0.025～0.03ml／kg，約0.4ml)，以3ml生理鹽水進行稀釋、搖勻，每次注入完畢用5ml生理鹽水沖洗管壁，分別觀察

8、肝動脈、肝臟、腹主動脈及左心室腔的血流灌注情況。重復(fù)注射時，間隔時間大于10min。全部聲學(xué)造影圖像存于CD盤，以備脫機分析。 5.圖像分析 檢查完成后啟動聲學(xué)密度分析軟件QLAB，選擇適當(dāng)大小和形狀的感興趣區(qū)(ROI)，分別置于待分析肝實質(zhì)、腹主動脈及左心室腔內(nèi)(ROI邊緣距包膜2mm以內(nèi))，注意避開較大的血管，ROI均取同樣大小和形狀，以便減少取樣誤差。由儀器自帶程序自動繪制成TIC曲線圖，以獲取各個狹窄程度的肝實質(zhì)

9、、腹主動脈及左心室腔的血流灌注的下列參數(shù)：PI，AUC，TTP和Alpha。 6.病理、生化檢查 所有動物在實驗結(jié)束后立即取小塊肝組織，以10％的福爾馬林固定，制成HE染色切片進行病理檢查，抽靜脈血5ml進行生化檢查。之后將實驗犬肝動脈結(jié)扎并處理創(chuàng)面，縫合切口，送實驗動物中心喂養(yǎng)24小時后推注空氣處死，取出肝臟，切取小塊肝組織再進行病理檢查以及生化檢查，并對兩組結(jié)果分別進行比較。 7.統(tǒng)計學(xué)分析 所有數(shù)據(jù)

10、用均數(shù)±標(biāo)準差表示，使用spss13.0統(tǒng)計軟件，均數(shù)間的比較用方差分析，兩兩比較用LSD法，相關(guān)關(guān)系用spearman相關(guān)分析。P≤0.05(雙側(cè))為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果: 在對50例次犬肝動脈(其中正常10次，各個狹窄程度共40次)進行超聲造影檢查后發(fā)現(xiàn)，超聲造影能清晰顯示肝動脈的走行并39次發(fā)現(xiàn)狹窄肝動脈，其表現(xiàn)為不同程度的造影劑局部充盈缺損，且顯示部位及程度與X線血管造影相吻合，檢查結(jié)果顯示僅漏診一例，其檢

11、查的敏感性、特異性和陽性預(yù)測值分別為100％、91％和98％，經(jīng)檢驗在特異性和陽性預(yù)測值方面優(yōu)于彩色多普勒。 應(yīng)用QLAB超聲造影定量分析軟件，超聲造影圖像顯示實驗犬肝動脈基礎(chǔ)狀態(tài)下造影后肝實質(zhì)回聲明顯增強，其TIC曲線上升陡直，迅速達到峰值強度，而后緩慢下降至基礎(chǔ)水平。肝動脈狹窄程度為50％、70％和90％情況下肝實質(zhì)均呈增強顯像，但均較肝動脈基礎(chǔ)狀態(tài)下增強程度減低，且增強程度隨狹窄程度加重而減弱，其TIC曲線上升速度減慢，峰

12、值減低。統(tǒng)計學(xué)分析結(jié)果顯示：與基礎(chǔ)狀態(tài)相比，肝動脈四種狹窄程度均使肝組織PI及PI比值減小(P<0.001)，并隨著狹窄程度的增加而逐漸減小(P<0.05)，且肝實質(zhì)PI值與肝動脈狹窄程度之間存在良好的相關(guān)關(guān)系(r=0.906,P<0.001)，而肝動脈四種狹窄程度下的AUC，TTP和Alpha與基礎(chǔ)狀態(tài)相比差別不具統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論: 超聲造影是一門用于評價實質(zhì)性臟器血流灌注的新興技術(shù)，它應(yīng)用微氣泡作為示蹤劑，在超聲條

13、件下觀察組織的血流灌注情況。與之匹配的脈沖反向諧波聲學(xué)造影技術(shù)允許使用更寬的帶寬，在提高分辨率地同時增加了造影劑地靈敏性。實驗結(jié)果表明：二者的結(jié)合避免了CDFI內(nèi)在的不足，可通過直接觀察肝動脈內(nèi)微氣泡流動所形成的帶狀二維灰階增強效果及狹窄時產(chǎn)生的局部充盈缺損較準確地顯示移植術(shù)后肝動脈狹窄并判斷其狹窄程度，有利于提高肝移植術(shù)后肝動脈并發(fā)癥診斷的準確性，且檢查結(jié)果與X線血管造影結(jié)果基本相符。 本實驗還采用QLAB定量分析技術(shù)，即將感