自發(fā)性高血壓大鼠阻力血管節(jié)律性舒縮的特征及其對降壓藥的反應(yīng).pdf

1、背景和目的: 血管舒縮活動(vasomotion)指的是血管組織張力及內(nèi)徑的周期性、節(jié)律性收縮與舒張現(xiàn)象，具有一定的頻率與振幅，小阻力血管及大彈力血管均可在體內(nèi)、體外自發(fā)產(chǎn)生或是在管腔內(nèi)壓改變、受機械力牽張、血管收縮激動劑等刺激下發(fā)生。部分研究認(rèn)為不同血管組織節(jié)律性舒縮活動的產(chǎn)生與電壓依賴性鈣通道、胞膜電位及由IP3受體介導(dǎo)的胞內(nèi)鈣離子振蕩性變化、磷脂酶C及磷脂酶A2通路等密切相關(guān)，而在高血壓病理狀態(tài)下，如自發(fā)性高血壓大鼠腸系膜

2、動脈及先兆子癇患者網(wǎng)膜動脈等阻力血管的節(jié)律性舒縮活動振幅均較血壓正常者顯著升高，研究顯示可能與高血壓狀態(tài)下血管平滑肌細(xì)胞間縫隙連接增多、內(nèi)皮一氧化氮(NO)功能不足等相關(guān)，但具體機制尚待進(jìn)一步明確，此外，高血壓時血管平滑肌細(xì)胞鈣內(nèi)流顯著增加也可能與節(jié)律性舒縮幅度的增強有關(guān)。 近年研究發(fā)現(xiàn)瞬時型感受器電位通道(transient receptor potential channels，TRPC)家族可介導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞鈣離子內(nèi)流，

3、該非選擇性陽離子通道可分為TRPC1、2、3、4、5、6、7等幾個亞型，在高血壓狀態(tài)下，大鼠單核細(xì)胞TRPC3及動脈平滑肌細(xì)胞TRPC6蛋白表達(dá)和介導(dǎo)的鈣離子內(nèi)流顯著增加。鈣池操縱鈣離子通道(store-operatedcalcium entry channels，SOCE)是一類由胞內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)儲存鈣耗竭而激活的鈣離子內(nèi)流通道，有研究顯示SOC的分子組成即是TRPC中的1、3和5亞型，而現(xiàn)已明確節(jié)律性舒縮的形成與肌漿網(wǎng)儲存鈣的周期性釋放、

4、再攝取形成的胞內(nèi)鈣離子振蕩性變化密切相關(guān)，另有研究表明，TRPC通道在ATP誘導(dǎo)的人類臍帶平滑肌細(xì)胞鈣離子振蕩中起作用，故TRPC可能在肌漿網(wǎng)的周期性耗竭、再充盈過程中被激活及失活關(guān)閉，由此介導(dǎo)的鈣離子周期性內(nèi)流也可能在節(jié)律性舒縮中起部分作用。 血管緊張素II1型受體拮抗劑(ARB)及鈣離子拮抗劑(CCB)作為臨床上廣泛應(yīng)用的降壓藥，不僅可有效降低血壓，還可改善心血管內(nèi)皮功能、逆轉(zhuǎn)高血壓所致心血管重構(gòu)損害，有研究顯示，長期應(yīng)用A

5、RB對SHR大鼠進(jìn)行干預(yù)后其主動脈TRPC3通道蛋白表達(dá)下降，采用RNA干擾的方法抑制TRPC3在血管平滑肌細(xì)胞上的表達(dá)后AngII介導(dǎo)的鈣離子內(nèi)流顯著減少，但該二種降壓藥對高血壓病理狀態(tài)下異常的阻力血管節(jié)律性舒縮是否有影響尚不清楚，本實驗將重點研究應(yīng)用坎地沙坦、替米沙坦及氨氯地平對SHR大鼠長期干預(yù)后對其阻力血管節(jié)律性舒縮的影響，并對發(fā)生影響的可能機制進(jìn)行初步探討。 對象與方法: 一、動物分組： 體重250-2

6、60g健康3月齡雄性SHR大鼠40只，隨機分為4組，每組10只，分別為SHR對照組、替米沙坦干預(yù)組(5mg/kg/d)、坎地沙坦干預(yù)組(4mg/kg/day)及氨氯地平干預(yù)組(10mg/kg/day)；健康3月齡雄性WKY大鼠10只為血壓正常對照組，干預(yù)組均將藥物混于少量蒸餾水中灌胃給藥，共干預(yù)16周，對照組給予等量蒸餾水灌胃。 一、血壓測量： 測定各組大鼠清醒狀態(tài)下尾動脈收縮壓，分別在干預(yù)開始時和干預(yù)后每4周測定，動態(tài)

7、觀察各組血壓變化。 三、血管環(huán)實驗： 干預(yù)結(jié)束后采用小血管張力測量儀測定各組大鼠腸系膜動脈節(jié)律性舒縮振幅，并觀察TRPC通道阻斷劑對節(jié)律性舒縮的影響。 四、免疫熒光染色： 將SHR大鼠腸系膜動脈外周脂肪結(jié)締組織仔細(xì)分離后免疫熒光染色證實TRPC通道蛋白在平滑肌細(xì)胞上的表達(dá)。 五、蛋白表達(dá)檢測： 提取各組大鼠腸系膜動脈蛋白，應(yīng)用Westem blot方法分析各組大鼠腸系膜動脈TRPC1、TR

8、PC3、TRPC4、TRPC5及TRPC6的蛋白表達(dá)情況。 結(jié)果: 1.與血壓正常WKY大鼠相比，SHR大鼠腸系膜動脈節(jié)律性舒縮幅度顯著增強(65.5±7.1％ vs.2.2±0.5％； n=6， p<0.01)； 2.與血壓正常WKY大鼠相比，SHR大鼠腸系膜動脈TRPC1、TRPC3及TRPC5的蛋白表達(dá)顯著增加(TRPC1表達(dá)：WKY1.00±0.13 vs. SHR1.60±0.10； p<0.01；TR

9、PC3表達(dá)：WKY1.00±0.18 vs. SHR1.70±0.26； p<0.05； TRPC5表達(dá)：WKY1.00±0.13 vs. SHR1.41±0.10； p<0.05； each n=6)； 3.TRPC通道阻斷劑可部分抑制SHR大鼠腸系膜動脈顯著增強的節(jié)律性舒縮振幅，使其舒縮節(jié)律發(fā)生紊亂(Gd3+:從107.3±10.7％降至63.1±10.6％；2-APB:從105.2±13.9％降至30.3±2.5％； SK

10、F96365:從109.9±15％降至23.5+9.6％，n=6，p<0.05)； 4.坎地沙坦、替米沙坦及氨氯地平干預(yù)組SHR大鼠血壓均顯著下降(SHR對照組：222±7mmHg；坎地沙坦組：123±7mmHg；替米沙坦組：115±6mmHg；氨氯地平組：122±5 mmHg； p<0.01； n=10)，但坎地沙坦及替米沙坦組SHR大鼠腸系膜動脈節(jié)律性舒縮幅度顯著減小，而氨氯地平干預(yù)組無明顯改變(SHR對照組：66±7％；坎

11、地沙坦組：14±3％；替米沙坦組：8±2％；氨氯地平組：57±7％，p<0.01； n=10)；同時，坎地沙坦、替米沙坦干預(yù)組腸系膜動脈TRPC1、TRPC3及TRPC5蛋白表達(dá)顯著下降(p<0.05；n=5)，而氨氯地平干預(yù)組無明顯改變(p>0.05；n=5)。 結(jié)論: 1. SHR大鼠腸系膜動脈TRPC1、TRPC3及TRPC5通道蛋白表達(dá)顯著增強，可能與其節(jié)律性舒縮幅度的顯著增加有關(guān)； 2.坎地沙坦、替米沙