檉柳ThNAC7基因的抗逆功能解析.pdf

1、許多NAC基因的表達(dá)受干旱、高鹽和ABA的誘導(dǎo)，有研究顯示NAC基因調(diào)控了植物的抗逆能力，參與植物細(xì)胞的多種生物學(xué)過程。然而，NAC基因在抗逆調(diào)控中的詳細(xì)功能尚不清楚。本研究通過對檉柳(Tamarix hispida)中克隆出來的一條NAC基因ThNAC7的抗逆性機(jī)制進(jìn)行了研究。
　　利用實(shí)時定量RT-PCR技術(shù)研究了ThNAC7基因?qū)Ω啕}、干旱以及ABA脅迫的表達(dá)。結(jié)果表明，在檉柳幼的根部和莖葉組織，該基因均能夠被NaC1、PE

2、G和ABA誘導(dǎo)表達(dá)。
　　利用我們已經(jīng)建立的瞬時侵染體系，同時我們采用三種方法對瞬時轉(zhuǎn)化過程進(jìn)行改進(jìn)，分別運(yùn)用三種方法將表達(dá)載體轉(zhuǎn)入檉柳幼苗內(nèi)，并對轉(zhuǎn)pBI121載體幼苗進(jìn)行GUS染色。檢測到轉(zhuǎn)GUS基因在轉(zhuǎn)基因幼苗內(nèi)的各組織均有表達(dá)。從而證明這三種轉(zhuǎn)化方法均能將過表達(dá)載體和抑制表達(dá)載體轉(zhuǎn)入檉柳植株內(nèi)。通過GUS染色分析，轉(zhuǎn)化方法1要優(yōu)于方法2、3，方法1中的GUS基因，在侵染后第7周仍能檢測到GUS基因的表達(dá)。
　　構(gòu)建的

3、ThNAC7基因的過表達(dá)載體pROK2-ThNAC7、RNAi抑制表達(dá)載體ThNAC7-RNAi以及對照載體pBI121，并將其瞬時轉(zhuǎn)化到檉柳中，獲得瞬時轉(zhuǎn)化的ThNAC7過表達(dá)、抑制表達(dá)及對照植株。對轉(zhuǎn)基因檉柳進(jìn)行了實(shí)時定量PCR檢測，過表達(dá)檉柳中的NAC7基因表達(dá)量增加了4倍，而抑制表達(dá)檉柳植株的NAC7基因表達(dá)量明顯受到抑制，表達(dá)量是對照檉柳的1/6。說明，ThNAC7基因已經(jīng)成功地在轉(zhuǎn)基因檉柳中實(shí)現(xiàn)了瞬時的過表達(dá)及抑制表達(dá)，可以

4、用于進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)。
　　利用組織化學(xué)染色包括NBT、DAB和依文思藍(lán)染色方法分析過表達(dá)、抑制表達(dá)和對照檉柳幼苗的活性氧清除能力和細(xì)胞的死亡程度。在非脅迫情況下，三者的活性氧積累和細(xì)胞膜受損情況相似，而在脅迫下，ThNAC7抑制表達(dá)檉柳活性氧積累和細(xì)胞膜受損情況明顯高于對照，而ThNAC7過表達(dá)檉柳的活性氧積累和細(xì)胞膜受損情況明顯低于對照。接著對三者的失水率、電解質(zhì)滲透率、葉綠素含量以及MDA含量進(jìn)行了進(jìn)一步測定，過表達(dá)植株的植物細(xì)