不同濃度的蔗糖溶液玻璃化冷凍人類精子的研究.pdf

1、第一部分不同濃度的蔗糖溶液玻璃化冷凍經(jīng)上游法處理后的人類精子
　　目的:
　　探討使用非滲透性冷凍保護(hù)劑—蔗糖溶液,玻璃化凍存大體積(0.5ml)人類精子的可行性,旨在為臨床提供更適宜的精子凍融方法。
　　方法:
　　收集正常精液標(biāo)本58份,每份精液經(jīng)上游法處理,收集上游精子懸液,分成6份,1份作為對(duì)照組(未處理),其余5份分別用常規(guī)慢速冷凍法、0.15M、0.20M、0.25M、0.30M蔗糖溶液冷凍精子,復(fù)蘇

2、后比較6組間精子活動(dòng)率、前向運(yùn)動(dòng)精子百分率、精子質(zhì)膜完整性、精子DNA完整性及頂體完整性。
　　結(jié)果:
　?、倬踊顒?dòng)率、前向運(yùn)動(dòng)百分率結(jié)果:經(jīng)冷凍復(fù)蘇后,所有冷凍組精子活動(dòng)率、前向運(yùn)動(dòng)百分率與冷凍前上游組精子活動(dòng)率(95.7±2.0)％和前向運(yùn)動(dòng)精子百分率(92.2±3.8)%比較均下降,差異顯著(P<0.05),其中0.20M蔗糖冷凍組、0.25M蔗糖冷凍組和常規(guī)慢速冷凍組的精子活動(dòng)率分別為(58.5±6.3%)、(53

3、.7±10.3)%和(54.2±5.3)%,3者間差異無(wú)顯著性(P>0.05),均明顯高于0.15M蔗糖冷凍組(46.8±7.2)%及0.30M蔗糖冷凍組(49.7±11.2)%(P<0.05)。前向運(yùn)動(dòng)百分率結(jié)果顯示:0.20M蔗糖冷凍組的精子前向運(yùn)動(dòng)率(47.5±6.8%)顯著高于常規(guī)慢速冷凍組(36.4±8.7%)、0.15M蔗糖冷凍組(35.4±7.4%)、0.25M蔗糖冷凍組(34.8±9.9)%及0.30M蔗糖冷凍組(24.

4、3±9.3)%,差異顯著(P<0.05),其中0.15M蔗糖冷凍組、0.25M蔗糖冷凍組與常規(guī)慢速冷凍組比較差異無(wú)顯著性(P>0.05);0.30M蔗糖冷凍組顯著低于常規(guī)慢速冷凍組(P<0.05)。
　　②精子膜完整率結(jié)果:所有冷凍組精子膜完整率較冷凍前上游組(99.0±0.9)%均顯著下降(P<0.05)。在冷凍組中0.20M蔗糖冷凍組的精子膜完整率(73.2±6.9)%顯著高于其它冷凍組(P<0.05)。常規(guī)慢速冷凍組,0.2

5、5M蔗糖冷凍組和0.30M蔗糖冷凍組分別為(63.9±6.3)%、(67.0±11.2)%和(62.9±12.4)%,3者間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),0.15M蔗糖冷凍組(59.7±8.8)%顯著低于其它冷凍組(P<0.05)。
　　③精子DNA完整率結(jié)果:經(jīng)冷凍復(fù)蘇后,常規(guī)慢速冷凍組、0.15M、0.20M、0.25M和0.30M蔗糖冷凍組精子DNA完整率分別為(87.2±4.7)%、(88.5±2.9)%、(90.1±2.

6、8)%、(88.1±3.9)%和(88.6±3.1)%,組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05);但均顯著低于冷凍前上游組(93.0±3.3)%(P<0.05)。
　?、芫禹旙w完整率:經(jīng)冷凍復(fù)蘇后,所有冷凍組精子頂體完整率較冷凍前上游組(94.1±2.8%)均顯著下降(P<0.05)。0.15M、0.20M、0.25M和0.30M蔗糖冷凍組精子DNA完整率分別為(48.4±8.6)%、(53.7±10.0)%、(53.8±8.4)%、(

7、53.4±12.5)%,組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05);均顯著高于常規(guī)慢速冷凍組(35.9±9.7)%(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　終濃度為0.20M的蔗糖溶液玻璃化冷凍人類精子解凍后可以獲得更高前向運(yùn)動(dòng)精子百分率,精子膜完整率和精子頂體完整率;相較常規(guī)慢速冷凍法,終濃度0.20M的蔗糖溶液玻璃化冷凍法更能夠有效避免精子在凍融過(guò)程中的損傷,并且玻璃化冷凍方法簡(jiǎn)便、快速、經(jīng)濟(jì)、安全有效。
　　第二部分0.20M蔗

8、糖溶液玻璃化冷凍附睪精子的研究
　　目的:
　　探討使用終濃度為0.20M蔗糖溶液玻璃化冷凍附睪精子(PESA)的可行性及應(yīng)用性。
　　方法:
　　實(shí)驗(yàn)前首先對(duì)蔗糖組精子進(jìn)行受精能力驗(yàn)證。收集IVF和ICSI周期中未成熟的卵母細(xì)胞(MI),進(jìn)行未成熟卵培養(yǎng)。卵母細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)成熟后,使用0.20M蔗糖組冷凍復(fù)蘇后的上游精子行ICSI操作,并統(tǒng)計(jì)受精率,卵裂率及優(yōu)質(zhì)胚胎率。驗(yàn)證可行性后,再通過(guò)比較終濃度為0.20M蔗糖

9、溶液玻璃化法(蔗糖組)和常規(guī)慢速冷凍法(常規(guī)組)的精子復(fù)蘇率、ICSI操作后其卵母細(xì)胞受精率、卵裂率及優(yōu)質(zhì)胚胎率及臨床妊娠率,評(píng)價(jià)兩種冷凍方法的冷凍效能。
　　結(jié)果:
　　經(jīng)培養(yǎng)成熟23枚卵母細(xì)胞后,使用0.20M蔗糖組冷凍復(fù)蘇后的上游精子行ICSI操作,受精率,卵裂率及優(yōu)質(zhì)胚胎率分別為73.9%、88.2%和20.0%。18例患者附睪精子標(biāo)本經(jīng)兩種方法冷凍后,蔗糖組和常規(guī)組中各有1例樣本未見活動(dòng)精子(蔗糖組和常規(guī)組冷凍失敗

10、的樣本并不為同1例樣本),余均有活動(dòng)精子。蔗糖組與常規(guī)組的復(fù)蘇率均低,分別為(22.0±12.7)%和(23.7±8.5)%,兩者差異無(wú)顯著性(P>0.05)。78枚成熟的卵母細(xì)胞使用蔗糖組的精子行ICSI操作,其卵母細(xì)胞受精率、卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎率及臨床妊娠率分別為88.5%,100%,68.1%和50%;95枚成熟的卵母細(xì)胞使用常規(guī)組的精子行ICSI操作,其卵母細(xì)胞受精率、卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎率及臨床妊娠率分別為85.3%,98.8%,6