大鼠脊髓慢性壓迫損傷后巢蛋白的表達(dá)規(guī)律的初步研究.pdf

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?br>　　 建立一種新的大鼠脊髓慢性壓迫性損傷模型,為探索脊髓受壓后的病理生理機(jī)制奠定基礎(chǔ)。探究慢性壓迫損傷后巢蛋白(nestin神經(jīng)干細(xì)胞的標(biāo)志蛋白)的表達(dá)規(guī)律及其意義。
　　 實(shí)驗(yàn)方法
　　 本實(shí)驗(yàn)改進(jìn)了前人的慢性膨脹材料壓迫模型,通過手術(shù)的方式植入壓迫材料,避免了植入過程中的直接損傷。于顯微鏡下,將大鼠胸7、8雙側(cè)椎弓根切斷,取下椎板,植入一種吸水膨脹材料,隨著壓迫物的膨脹,逐漸形成不同程度的慢性壓迫脊

2、髓損傷實(shí)驗(yàn)動物模型。40只wistar大鼠隨機(jī)分為手術(shù)組30只,對照組10只。其中對照組進(jìn)行同樣手術(shù),但不植入壓迫物。術(shù)后觀察,如大鼠出現(xiàn)雙下肢癱瘓癥狀,考慮為術(shù)中損傷所致,處死,不列入統(tǒng)計(jì)。術(shù)后青霉素抗炎治療5天。手術(shù)后在第1、3、7、14、28天通過BBB評分進(jìn)行行為學(xué)功能評定,取自距壓迫邊緣5mm段脊髓組織,假手術(shù)組大鼠作為對照組,行病理學(xué)檢查及巢蛋白免疫組織化學(xué)染色,半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(reverse transcri

3、ption-polymerase chainreaction,RT-PCR)測定巢蛋白mRNA的表達(dá),計(jì)算機(jī)圖像分析儀定量分析,同時(shí)測量壓迫段椎管直徑及緩膨脹材料侵占厚度。椎管侵占率=侵占厚度/壓迫段椎管直徑。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　 本實(shí)驗(yàn)在建立大鼠慢性壓迫脊髓損傷模型后進(jìn)行行為學(xué)觀察,組織學(xué)及病理學(xué)檢測,三者相符合。大鼠慢性壓迫脊髓損傷模型成立。Nestin表達(dá)陽性的樹狀突起延伸至灰質(zhì),在灰質(zhì)中的表達(dá)主要分布于神經(jīng)元附

4、近和血管周圍,損傷后第一天即開始表達(dá),傷后1周達(dá)到高峰,2周開始下降,4周時(shí)幾乎無表達(dá)。模型建寺后24小時(shí)已檢測出巢蛋白mRNA表達(dá),1周時(shí)達(dá)峰值,以后逐漸下降。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)論
　　 此模型較以往模型相比,具有制作簡單,損傷程度可調(diào)整,脊髓損傷能表現(xiàn)出不同的壓迫程度,可重復(fù)性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。為進(jìn)一步研究脊髓慢性壓迫損傷病理機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。病理學(xué)檢測結(jié)果顯示損傷3-7天以后受壓處脊髓組織液化壞死,瘢痕化并逐漸出現(xiàn)了神經(jīng)細(xì)胞數(shù)目

5、的減少和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的增生,而BBB評分和大鼠脊髓病理學(xué)改變在7天以后變化較快,提示早期減壓!巢蛋白為神經(jīng)干細(xì)胞前體細(xì)胞的標(biāo)志蛋白,脊髓損傷后蛋白表達(dá)陽性的細(xì)胞在脊髓自身修復(fù)中可能發(fā)揮積極的作用。慢性脊髓損傷可引起巢蛋白及巢蛋白mRNA在脊髓白質(zhì)、灰質(zhì)和中央管室管膜細(xì)胞中的表達(dá),并表現(xiàn)一定的變化規(guī)律,損傷后即有表達(dá),1周達(dá)高峰,2周開始下降,因此,脊髓損傷后采取恰當(dāng)?shù)臅r(shí)機(jī)行神經(jīng)干細(xì)胞移植,可能會有利于損傷的修復(fù)和功能重建。此外,損傷后如