孕期及哺乳期低劑量三丁基錫暴露對子代小鼠生殖系統(tǒng)的影響.pdf

1、有機錫化合物( Organo-tin Compounds)被廣泛用于殺蟲劑、防腐劑（木材、纖維及皮革）、工業(yè)殺菌劑、輪船表面防生物附著涂料的毒性添加劑和塑料制品穩(wěn)定劑等。由于應(yīng)用廣泛，有機錫化合物已對全球環(huán)境（尤其是水體）造成了嚴(yán)重的污染。有機錫化合物可以經(jīng)呼吸道、消化道和皮膚吸收。三丁基錫(TributyltinTBT)是有機錫化合物中重要的一種，已有的研究顯示TBT對哺乳動物可產(chǎn)生免疫毒性、神經(jīng)毒性、生殖毒性等。目前關(guān)于有機錫化合物

2、的研究中，暴露劑量都較高，且對子代影響的研究較少。目的：
　　 研究孕期及哺乳期低劑量TBT暴露對子代小鼠生長發(fā)育、青春期和成年生殖系統(tǒng)的影響，以評估孕期及哺乳期低劑量三丁基錫暴露可能對人類后代可能產(chǎn)生的影響。方法：
　　 將清潔級健康妊娠KM小鼠隨機分為100、10、1μg/kg TBT染毒組和陰性對照組（玉米油），每組6只。從妊娠第6天(GD6)起，采用經(jīng)口灌胃方式進(jìn)行染毒，每天1次，直至哺乳期結(jié)束，灌胃劑量按照每天

3、稱量的體重計算。仔鼠出生后記錄仔鼠數(shù)量、雌雄數(shù)量及體重，觀察是否有畸形及死亡情況。仔鼠出生后第1天(PND1)、3、5、7、14、21天時稱量仔鼠體重，PND12開始觀察仔鼠睜眼情況，PND13開始觀察睪丸下降情況，PND20開始觀察陰道張開情況，PND21開始觀察雌鼠初潮情況。PND28開始觀察包皮分離情況。仔鼠斷奶后每周稱量一次體重，計算體重增加量。PNDs1、3、5、7、9、14測量仔鼠翻正時間（Righting Reflex）和

4、懸崖憎惡反應(yīng)時間（Cliff-drop Aversion Reflex）。
　　 PND49時各劑量組隨機抽取雌雄各10只仔鼠，取血，分離血清，取肝臟、脾臟、腎臟、胸腺、睪丸、附睪或子宮、卵巢，稱重并計算臟器系數(shù)。檢測血清中雌激素（Estrogen，E2）和雄激素(Testosterone，T)水平及睪丸勻漿中T水平。其它仔鼠飼養(yǎng)至5月齡（152天）時，取血，分離血清，取肝臟、脾臟、腎臟、胸腺、睪丸、附睪或子宮、卵巢，稱重并計算

5、臟器系數(shù)。檢測血清及睪丸勻漿中T及E2水平。應(yīng)用western-blotting技術(shù)分析雄鼠肝臟中CYP1A2、2C6蛋白的表達(dá)。PND49及152的雄性小鼠觀察精子活力、精子計數(shù)和精子畸形率，觀察睪丸的病理變化。
　　 結(jié)果：本實驗結(jié)果顯示，TBT對母鼠的毒性作用：100μg/kg劑量組母鼠孕期體重增加量與對照組相比顯著降低(P＜0.01)。
　　 TBT對妊娠結(jié)果的影響：各染毒組母鼠產(chǎn)仔數(shù)量、仔鼠哺乳期死亡率和仔鼠雌

6、雄比例與對照組相比無顯著差異（P＞0.05）。
　　 TBT對仔鼠生長發(fā)育的影響：各染毒組仔鼠睜眼時間比對照組顯著延遲，
　　 各染毒組仔鼠在PND7時及1μg/kg和100μg/kg劑量組在PND3時懸崖憎惡反應(yīng)時間和10μg/kg和100μg/kg劑量組在PND3時翻正時間比對照組顯著延遲，
　　 各染毒組在PNDs3、5、21時及10μg/kg劑量組在PND1時的體重，100μg/kg劑量組PND1到PND

7、3時的體重增加量和10μg/kg及100μg/kg劑量組PND14到PND21時的體重增加量與對照組相比顯著降低(P＜0.05,P＜0.01)。
　　 TBT對子代雌性小鼠生殖系統(tǒng)的影響：與對照組相比，各染毒組子代雌性小鼠的陰道張開時間和初潮時間顯著提前，初潮時仔鼠體重顯著降低(P＜0.01)；PND49時100μg/kg劑量組雌性仔鼠血清雌激素水平明顯升高(P＜0.01)；各染毒組子代雌性小鼠在PND21時體重顯著降低，10μ

8、g/kg劑量組在PND21-49時體重增加量顯著增加(P＜0.01,P＜0.05)；10μg/kg劑量組雌小鼠脾臟重量及其臟器系數(shù)顯著降低，1μg/kg及100μg/kg劑量組腎臟重量及其臟器系數(shù)顯著增加(P＜0.05,P＜0.01)；成年雌小鼠100μg/kg劑量組在PND56、PND70和PND152時體重，PND49～63和PND49～152時體重增加量顯著降低，10μg/kg劑量組在PND84時體重增高(P＜0.05,P＜0.0

9、1)；100μg/kg劑量組卵巢重量明顯降低(P＜0.05)；染毒組小鼠發(fā)情周期異常率明顯升高(P＜0.05)；
　　 TBT對子代雄性小鼠生殖系統(tǒng)的影響：與對照組相比，青春期雄小鼠100μg/kg劑量組在PNDs21、42時體重和10μg/kg劑量組在PND42時體重以及各染毒組在PND49時體重明顯降低，10μg/kg劑量組在PND35-42時和1μg/kg劑量組在PND42-49時體重增加量顯著減少(P＜0.05,P＜0.

10、01)；各染毒組仔鼠睪丸下降時間及包皮分離時間顯著延遲，1μg/kg和10μg/kg劑量組仔鼠精子畸形率顯著升高，100μg/kg劑量組睪丸系數(shù)顯著增加(P＜0.05，P＜0.01)；PND49時各染毒組精子計數(shù)、血清T水平有減少的趨勢，睪丸組織中T水平有升高的趨勢，但與對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；青春期各染毒組雄小鼠血清E2/T顯著升高，睪丸組織中E2/T和10μg/kg及100μg/kg劑量組睪丸組織中E2水平顯著降

11、低(P＜0.05，P＜0.01)；成年雄性小鼠100μg/kg劑量組在PND63時體重比對照組顯著降低，10μg/kg劑量組在PND77-152時體重增加量和1μg/kg及10μg/kg劑量組在PND49-152時體重增加量比對照組顯著升高(P＜0.01)；成年雄性小鼠100μg/kg劑量組脾臟重量顯著升高，腎臟重量及其臟器系數(shù)明顯降低，10μg/kg劑量組睪丸重量，肝臟和脾臟系數(shù)顯著升高(P＜0.01，P＜0.05)；成年雄性小鼠各染

12、毒組仔鼠血清E2水平及1μg/kg劑量組睪丸組織中T水平和10μg/kg及100μg/kg劑量組E2/T，各染毒組小鼠精子計數(shù)和精子活力比對照組顯著降低(P＜0.05，P＜0.01):PND152時血清中T及睪丸組織中E2及E2/T和精子畸形率與對照組相比均無顯著性差異（P＞0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 本實驗通過使孕期及哺乳期母鼠暴露于低劑量TBT，觀察TBT對其子代的生長發(fā)育及生殖系統(tǒng)的影響，可以得到以下結(jié)論：1

13、、孕期及哺乳期低劑量的TBT暴露就會對產(chǎn)生母體毒性，能夠使孕鼠體重增加量降低。能夠影響子代小鼠的生長發(fā)育，并對子代小鼠產(chǎn)生內(nèi)分泌干擾作用，可以使子代雌性小鼠性早熟。2、孕期及哺乳期低劑量TBT暴露對子代小鼠具有器官毒性和生殖毒性，成年雌性小鼠卵巢重量降低，子代青春期雄性小鼠睪丸臟器系數(shù)升高。雌性小鼠發(fā)情周期紊亂，精子質(zhì)量下降。3、孕期及哺乳期低劑量TBT暴露對子代小鼠的毒性作用可能有性別差異。TBT能使子代成年雄性小鼠體重增加，體重增長