CIA大鼠關(guān)節(jié)滑膜骨橋蛋白的表達及甲氨蝶呤、99Tc-MDP的干預作用.pdf

1、目的:
　　 本課題擬在建立大鼠膠原誘導關(guān)節(jié)炎(Collagen—induced arthritis,CIA)的基礎(chǔ)上,研究空白對照組、模型組、甲氨蝶呤組(Methotrexate,MTX)組、99锝-亞甲基二膦酸鹽組(Technetium[99Tc]Methylenediphosphonate,99Tc-MDP)大鼠的關(guān)節(jié)炎癥狀,給藥前后血清、關(guān)節(jié)液中骨橋蛋白(Osteopontin,OPN)的水平及關(guān)節(jié)滑膜OPN表達的變化,

2、初步探討OPN在CIA發(fā)病過程中可能的作用以及藥物對其的影響。
　　 方法:
　　 1.選擇體重140-160g的雄性Wistar大鼠60只,留取10只作為空白對照組,其余50只用于建立CIA模型。于大鼠尾根部多處皮下注射雞Ⅱ型膠原乳劑(0.5ml／只),一周后等量乳劑同法加強免疫一次。空白對照組相同時間、相同部位注射等體積生理鹽水作為對照。
　　 2.在造模4周后,依據(jù)大鼠關(guān)節(jié)炎的程度和范圍以及關(guān)節(jié)腫大和變形情

3、況對其進行關(guān)節(jié)炎指數(shù)(arthritis index,AI)的評定,AI≥6分即為造模成功。選擇30只CIA誘導成功大鼠,隨機分為模型組、MTX組和99Tc-MDP組,每組10只。MTX組每周給予MTX尾靜脈注射,在給藥間歇內(nèi)給予等體積生理鹽水尾靜脈注射,99Tc-MDP組每日給予99Tc-MDP尾靜脈注射,空白對照組和模型組用等體積生理鹽水尾靜脈注射,給藥時間為3周。
　　 3.觀察各組大鼠癥狀(包括大體觀、體重、關(guān)節(jié)炎指數(shù)、

4、足爪容積),于給藥前及給藥1、2、3周后采取各組大鼠尾靜脈血,以ELISA的方法測定血清OPN水平。給藥3周后,處死大鼠,留取大鼠膝關(guān)節(jié)腔關(guān)節(jié)液,以ELISA的方法測定關(guān)節(jié)液中OPN水平。留取雙側(cè)膝關(guān)節(jié)滑膜,包埋,切片,行HE染色,光鏡下觀察關(guān)節(jié)滑膜的病理變化并進行評分。用免疫組織化學法檢測滑膜組織OPN的表達,并采用計算機圖像分析系統(tǒng)對其表達量進行半定量分析。
　　 結(jié)果:
　　 1.隨著CIA大鼠發(fā)病時間延長,關(guān)節(jié)和

5、足爪腫脹逐漸增加,造模4周后,模型組大鼠體重明顯小于空白對照組(P<0.01),模型組大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)、足爪容積明顯高于空白對照組(P<0.01),模型組、MTX組和99Tc-MDP組血清OPN水平明顯高于空白對照組(P<0.01)。
　　 2.給藥3周后,MTX組和99Tc-MDP組大鼠足爪容積較模型組下降(P<0.05),關(guān)節(jié)炎指數(shù)也較模型組下降(P<0.01)體重較模型組上升(P<0.05),足爪容積、關(guān)節(jié)炎指數(shù)仍高于空白對

6、照組(P<0.01),MTX組和99Tc-MDP組血清及關(guān)節(jié)液OPN水平較模型組降低(P<0.01),但仍高于空白對照組(P<0.01),MTX組、99Tc-MDP組之間無明顯差異(P>0.05)。
　　 3.給藥3周后,病理結(jié)果顯示模型組大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織有大量炎性細胞浸潤,有血管翳形成,而藥物干預組大鼠滑膜組織炎性細胞浸潤減輕。MTX組和99Tc-MDP組滑膜病理積分均明顯小于模型組(P<0.01),兩組之間無明顯差異(P>0

7、.05)。
　　 4.給藥3周后,免疫組織化學染色顯示模型組、MTX組和99Tc-MDP組大鼠滑膜OPN表達明顯高于空白對照組(P<0.01)。與模型組比較,MTX組和99Tc-MDP組大鼠滑膜OPN表達減少(P<0.05),兩組之間無明顯差異(P>0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.本實驗采用雞Ⅱ型膠原成功建立了大鼠膠原誘導性關(guān)節(jié)炎動物模型。
　　 2.CIA大鼠血清、關(guān)節(jié)液骨橋蛋白水平上升,關(guān)節(jié)滑膜