EBV不同感染狀態(tài)與SLE發(fā)病、病情活動(dòng)性相關(guān)性研究.pdf

1、目的：
　　 ①系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic erythematosus lupus，SLE)患者B細(xì)胞活化活躍，EB病毒(Epstein-Barr virus，EBV)具有嗜B細(xì)胞特性，能夠?qū)е翨細(xì)胞活化。通過(guò)檢測(cè)EBV DNA拷貝數(shù)，探討其與SLE發(fā)病、病情活動(dòng)性(systemicerythematosus lupus disease activity index,SLEOAI)的關(guān)系。
　　 ②EBV有潛伏感染

2、和裂解感染兩種狀態(tài)，不同感染狀態(tài)表達(dá)不同抗原，其中某些抗原區(qū)域與SLE特異性抗體的部分序列高度同源，導(dǎo)致B細(xì)胞通過(guò)交叉反應(yīng)產(chǎn)生不同自身抗體。通過(guò)檢測(cè)EBV不同感染時(shí)期基因表達(dá)量，探討其與SLE發(fā)病、病情活動(dòng)性的關(guān)系。
　　 ③EBV不同感染時(shí)期表達(dá)不同抗原，不同機(jī)體對(duì)不同抗原進(jìn)行不同強(qiáng)度免疫應(yīng)答，產(chǎn)生不同類(lèi)型和不同濃度抗EBV抗體，通過(guò)檢測(cè)血清中EBV不同感染時(shí)期相關(guān)抗體，探討其與SLE發(fā)病、病情活動(dòng)性的關(guān)系。
　　 方

3、法：
　　 ①應(yīng)用Real-time熒光定量PCR定量檢測(cè)55例SLE患者與52例正常對(duì)照外周血單個(gè)核細(xì)胞中EBV DNA拷貝數(shù)；
　　 ②應(yīng)用Real-time熒光定量PCR定量檢測(cè)55例SLE患者與52例正常對(duì)照外周血單個(gè)核細(xì)胞中編碼EBV核抗原(EB nuclear antigen，EBNA-1)的潛伏期基因BKRF1、編碼EBV衣殼抗原(viral capsid antigen，VCA)的裂解期基因BcLF1和編

4、碼gp350/220糖蛋白的裂解期基因BLLF1 mRNA相對(duì)表達(dá)水平。
　　 ③應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay，ELISA)定量檢測(cè)44例SLE患者與43例正常對(duì)照血清中EB病毒VCA-IgG、VCA-IgM、EBNA-1-IgG抗體水平。
　　 結(jié)果：
　　 1、EBV DNA拷貝數(shù)與SLE發(fā)病、病情活動(dòng)、自身抗體的相關(guān)性
　　 ①55例SLE

5、患者EBV DNA中位拷貝數(shù)為19.46拷貝/ug，顯著性高于52例正常對(duì)照的3.31拷貝/ug(t=2.246，P=0.027)。
　　 ②其中有10例疾病活動(dòng)性相對(duì)穩(wěn)定的SLE初診患者（SLEDAI均數(shù)為6.5），初診時(shí)EBV DNA中位拷貝數(shù)為68.27拷貝/ug，而病情復(fù)發(fā)時(shí)（SLEDAI均數(shù)為13.4）EBV DNA中位拷貝數(shù)為1530.00拷貝/ug，配對(duì)t檢驗(yàn)有顯著性差異(t=3.262，P=0.031)。

6、　　 ③55例SLE患者中有25例病程≤1年，其EBV DNA中位拷貝數(shù)為36.57拷貝/ug，高于30例病程大于1年患者的EBV DNA中位拷貝數(shù)29.76拷貝/ug(t=2.532，P=0.019)。
　　 ④55例SLE患者中有23例年齡段為20-30歲，其EBV DNA的中位拷貝數(shù)為65.9拷貝/ug，高于10例40歲以上患者的EBV DNA中位拷貝數(shù)41.1拷貝/ug(t=2.069，P<0.05)。
　　

7、⑤23例20-30歲年齡段的SLE患者，抗Sm、抗SSA抗體陽(yáng)性率分別為47.8％、78.3％，顯著性高于其他年齡段患者的抗Sm、抗SSA抗體陽(yáng)性率（55例SLE患者中有8例年齡小于20歲、14例年齡30-40歲、10例年齡大于40歲，其抗Sm、抗SSA抗體陽(yáng)性率分別為0％、35.7％、16.7％)(X2=7.848,P=0.049;X2=7.857,P=0.049)。
　　 2、EBV不同感染時(shí)期的基因表達(dá)與SLE發(fā)病、病情活

8、動(dòng)性的關(guān)系
　　 ①55例SLE患者EBV裂解增殖期基因BLLF1陽(yáng)性率為77.6％，顯著性高于52例正常對(duì)照的BLLF1陽(yáng)性率59.6％(X2=5.360，P=0.021)；SLE患者的BLLF1相對(duì)表達(dá)量為0.000103±0.139081，顯著性高于正常對(duì)照組的0.000006±0.456916(t=3.333，P=0.002)。SLE患者的BLLF1基因表達(dá)量與SLEDAI積分呈正相關(guān)(r=0.343，P=0.003)。

9、
　　 ②55例SLE患者和52例正常對(duì)照的EBV潛伏期基因BKRF1表達(dá)陽(yáng)性率均為100％。55例SLE患者EBV潛伏期基因BKRF1相對(duì)表達(dá)量為0.000051±0.280097，與52例正常對(duì)照EBV潛伏期基因BKRF1相對(duì)表達(dá)量0.000030±0.225469相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t=1.132，P=0.260)。
　　 ③55例SLE患者和52例正常對(duì)照的EBV裂解期基因BcLF1表達(dá)陽(yáng)性率均為100％。55例S

10、LE患者EBV裂解期基因BcLF1相對(duì)表達(dá)量為0.000034±0.267016，與52例正常對(duì)照EBV裂解期基因BcLF1相對(duì)表達(dá)量0.000018±0.283811相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t=0.579，P=0.566)。
　　 3、EBV不同感染時(shí)期的相關(guān)抗體與SLE發(fā)病、病情活動(dòng)性的關(guān)系
　　 因ELISA試劑盒板孔限制，僅對(duì)44例SLE患者和43例正常對(duì)照的EBV血清學(xué)指標(biāo)進(jìn)行了檢測(cè)。
　　 ①44例SLE患

11、者中有40例血清EBVVCA-IgG抗體陽(yáng)性（陽(yáng)性率為90.91％），43例正常對(duì)照中有32例血清EBV VCA-IgG抗體陽(yáng)性（陽(yáng)性率為74.42％），兩組VCA-IgG抗體陽(yáng)性率相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(X2=4.145，P=0.042)。40例VCA-IgG抗體陽(yáng)性SLE患者血清VCA-IgG中位濃度為30013.95U/ml，與32例VCA-IgG抗體陽(yáng)性正常對(duì)照血清VCA-IgG中位濃度31073.37U/ml相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t=0

12、.554，P=0.582)。
　　 ②44例SLE患者中有4例血清EBV VCA-IgM抗體陽(yáng)性（陽(yáng)性率為9.09％），43例正常對(duì)照中有1例血清EBV VCA-IgM抗體陽(yáng)性（陽(yáng)性率為2.33％），兩組VCA-IgM抗體陽(yáng)性率相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(X2=1.838，P=0.175)。4例VCA-IgM抗體陽(yáng)性SLE患者血清VCA-IgM中位濃度為24044.51U/ml，與1例VCA-IgM抗體陽(yáng)性正常對(duì)照血清VCA-IgM中位濃

13、度10065.21U/ml相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t=1.348，P=0.270)。
　　 ③44例SLE患者中有37例血清EBNA-I-IgG抗體陽(yáng)性（陽(yáng)性率為84.09％），43例正常對(duì)照中有41例血清EBNA-1-IgG抗體陽(yáng)性(陽(yáng)性率為95.35％)，兩組EBNA-1-IgG抗體陽(yáng)性率相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(X2=2.972，P=0.085)。37例EBNA-1-IgG抗體陽(yáng)性SLE患者血清EBNA-1-IgG中位濃度為30013.

14、95U/ml，與41例正常對(duì)照血清EBNA-1-IgG中位濃度12452.25U/ml相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t=0.099，P=0.921)。
　　 結(jié)論：
　　 ①EBV感染可能參與SLE發(fā)病和復(fù)發(fā)。
　　 ②EBV感染可能參與SLE早期發(fā)病。
　　 ③20-30歲SLE高發(fā)年齡段EBV復(fù)制活躍。
　　 ④EBV通過(guò)BLLF1活化B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生自身抗體引發(fā)臨床癥狀。
　　 ⑤EBV裂解期基因