呼吸道合胞病毒單克隆抗體篩選和診斷試劑的初步調(diào)試.pdf

1、呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus，RSV)，是引起全世界范圍內(nèi)嬰幼兒下呼吸道感染的主要病原。22％的5歲以下兒童下呼吸道感染病例與RSV相關(guān)，全球每年報道病例數(shù)3000萬例，其中340萬感染兒童需住院治療。全球每年有6.6-19.9萬5歲以下兒童死于RSV感染，其中99％發(fā)生在發(fā)展中國家，是次于肺炎鏈球菌及副流感嗜血桿菌引起的5歲以下兒童下呼吸道感染的第三大死因。早產(chǎn)兒、支氣管及肺發(fā)育不良者、先天性

2、心臟病及免疫缺陷的嬰幼兒RSV感染率可達(dá)50-70％，致死率高達(dá)5％。血清學(xué)檢測顯示幾乎所有兩周歲內(nèi)兒童感染過RSV，RSV自然感染后產(chǎn)生的免疫不充分，約36％的嬰幼兒在2周歲內(nèi)有反復(fù)感染現(xiàn)象。
　　 RSV的檢測方式主要有細(xì)胞（組織）培養(yǎng)分離法、血清學(xué)診斷、免疫熒光法和核酸擴(kuò)增技術(shù)(PCR)等。細(xì)胞（組織）培養(yǎng)分離耗時長，不適合臨床快速診斷;免疫熒光法試劑主要依靠進(jìn)口，檢測過程需要輔助儀器（熒光顯微鏡）價格昂貴，且結(jié)果易受主觀

3、影響，不適合中小醫(yī)院普及;核酸擴(kuò)增技術(shù)對操作者要求較高，且反復(fù)移液過程中容易造成污染。
　　 目前國內(nèi)尚未有RSV快診相關(guān)試劑上市，開發(fā)快速、廉價、易于判斷結(jié)果的早期檢測試劑在指導(dǎo)臨床醫(yī)師及時、明確用藥治療，防止抗生素的濫用、RSV流行性調(diào)查和控制RSV的蔓延都具有重大意義。
　　 本研究制備了72株識別RSV膜蛋白F的小鼠單克隆抗體，并對其病毒捕獲能力、抗病毒中和活性、分型等性質(zhì)進(jìn)行了鑒定。根據(jù)這72株單克隆抗體病毒捕

4、獲PCR的結(jié)果，挑選了30株病毒捕獲能力較強(qiáng)的單克隆抗體進(jìn)行診斷試劑的初步調(diào)試，進(jìn)行包被工藝和試劑反應(yīng)條件的摸索與優(yōu)化。最終篩選出3對較好的檢測備選配對 C-6D6/H-3G9-1-HRP、C-9D4/H-3G9-1-HRP、G-5A6-8/H-3 G9-1-HRP。
　　 并選取3對配對中檢測效果最好的C-9D4/H-3G9-1-HRP與美國DiagnosticHybrids公司研發(fā)的的七項呼吸道病毒檢測試劑盒（免疫熒光法）進(jìn)

5、行了比較，分別用兩種方法檢測了重慶兒童醫(yī)院的58份RSV陽性和14份RSV陰性鼻咽抽吸物(NPA)。結(jié)果顯示本研究所獲得的檢測配對檢出率為79.31％(46/58)，而Diagnostic Hybrids公司的免疫熒光試劑盒檢出率為74.13(43/58)，兩種檢測方式檢測結(jié)果x2=0.434，說明兩種檢測方式一致性較好，兩種檢測方式結(jié)果間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。對24份RSV陰性NPA樣本（其中10份流感陽性）進(jìn)行特異度檢測