人外周血耐受性樹突狀細胞的誘導培養(yǎng)及其DC-STAMP的表達研究.pdf

1、目的:誘導培養(yǎng)人外周血耐受性樹突狀細胞（TolDCs）并動態(tài)觀察TolDCs誘導過程樹突狀細胞-特異性跨膜蛋白(dendritic cells-specific transmembrane protein,DC-STAMP)mRNA的表達水平。
　　方法:（1）免疫磁珠分選法獲得人外周血CD14+單核細胞，采用細胞因子GM-CSF、IL-4、地塞米松和LPS聯(lián)合培養(yǎng)誘導TolDCs;（2）觀察培養(yǎng)細胞的形態(tài)變化，流式細胞技術(shù)檢測C

2、D83、CD86和CD14的表達，并將培養(yǎng)的細胞與T淋巴細胞共培養(yǎng)觀察T淋巴細胞增殖反應(yīng);（3）采用實時定量PCR對TolDCs誘導培養(yǎng)過程中DC-STAMP mRNA表達水平進行動態(tài)觀察。
　　結(jié)果:（1）CD14+單核細胞經(jīng)粒細胞巨噬細胞刺激因子（Granulocyte-mac rop ha ge colony-stimulating factor，GM-CSF）、白介素-4（Interleukin-4，IL-4）、脂多糖（L

3、ipopolysaccharide，LPS）誘導培養(yǎng)后胞體變大，出現(xiàn)樹枝狀突起，為典型的成熟DCs形態(tài)，加地塞米松磷酸鈉（Dexamethasone sodium phosphate，Dex）誘導培養(yǎng)后胞體亦變大，但未見明顯樹枝狀突起，缺乏典型的成熟DCs形態(tài);（2）CD14+單核細胞經(jīng)GM-CSF、IL-4培養(yǎng)后使CD83和CD86表達上調(diào)，CD14表達下調(diào)，加Dex聯(lián)合誘導培養(yǎng)后DCs表面CD83、CD86表達下調(diào)、CD14表達上調(diào)