應(yīng)用腫瘤相關(guān)cDNA芯片篩查卵巢癌相關(guān)基因的初步研究.pdf

1、近年來發(fā)展起來的基因芯片技術(shù)具有高通量、并行性的特點(diǎn)，可以快速、準(zhǔn)確的檢測大量基因，在分析疾病相關(guān)基因方面具有極大的優(yōu)勢?；蛐酒夹g(shù)可分析樣本的基因表達(dá)特征，如腫瘤和正常組織的差別、轉(zhuǎn)移灶與原發(fā)灶的差別以及不同病理類型的差別，尋找發(fā)生明顯變化的基因和各種表達(dá)差異基因之間的關(guān)系，利于研究腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展機(jī)制，為指導(dǎo)治療和預(yù)后監(jiān)測提供線索。 盡管目前應(yīng)用基因芯片技術(shù)篩查卵巢癌相關(guān)基因已有報(bào)道，但一般病例數(shù)很少，所得結(jié)果的代表性不強(qiáng)

2、；或僅限于“發(fā)現(xiàn)”差異表達(dá)的基因，但對于基因的闡述和認(rèn)識(shí)不足，缺乏一種綜合性的分析；并且大多數(shù)研究應(yīng)用的是市售的芯片，相對于腫瘤來講針對性不強(qiáng)。針對這種情況，通過查閱文獻(xiàn)，從國外購進(jìn)特異性的克隆后自行構(gòu)建了腫瘤相關(guān)的cDNA芯片，應(yīng)用這種芯片篩選了14例卵巢癌患者的16例標(biāo)本，將發(fā)生半數(shù)以上差異性表達(dá)的基因列表分析，并將部分基因按功能分類闡述其變化趨勢，同時(shí)重點(diǎn)分析了1例顆粒細(xì)胞瘤和1例未成熟畸胎瘤和2例卵巢上皮癌癌旁組織的差異表達(dá)基因

3、。期望得到有關(guān)卵巢癌發(fā)生和進(jìn)展的分子生物學(xué)基礎(chǔ)，為疾病的靶向治療和預(yù)后監(jiān)測等提供理論參考。 目的： 應(yīng)用實(shí)驗(yàn)室自主構(gòu)建的腫瘤相關(guān)cDNA芯片篩查卵巢癌相關(guān)基因，探討卵巢癌發(fā)生和進(jìn)展的分子機(jī)制，聯(lián)系不同病理類型進(jìn)行分析，為臨床治療和預(yù)后監(jiān)測提供參考。 方法： 1.自行構(gòu)建包含2560個(gè)點(diǎn)陣的腫瘤相關(guān)cDNA芯片。 2.標(biāo)本18份，正常卵巢2例，卵巢漿液性乳頭狀癌12例加癌旁組織2例，顆粒細(xì)胞瘤1例，

4、未成熟畸胎瘤1例。提取腫瘤組織與正常卵巢組織總RNA，反轉(zhuǎn)錄后標(biāo)記為cDNA探針，與芯片雜交后經(jīng)掃描獲取圖象，應(yīng)用Quantarray3.0軟件分析，得到基因表達(dá)的數(shù)據(jù)資料。應(yīng)用半定量RT-PCR方法對cDNA芯片檢測到的某些差異表達(dá)基因進(jìn)行驗(yàn)證。 結(jié)果： 1.自制的包含2560個(gè)基因點(diǎn)陣的cDNA芯片，實(shí)驗(yàn)證實(shí)標(biāo)本與芯片雜交結(jié)果良好，掃描圖象信號(hào)清晰，背景信噪低，重復(fù)性好。 2.16例標(biāo)本，發(fā)生半數(shù)以上差異表達(dá)

5、的基因101個(gè)，上調(diào)基因35個(gè)，下調(diào)基因66個(gè)。將基因按照功能分為：(1)代謝相關(guān)酶類基因；(2)癌基因和抑癌基因；(3)黏附分子基因；(4)蛋白酶及其抑制劑基因；(5)生長因子及其受體基因；(6)凋亡及增殖相關(guān)基因；(7)熱休克蛋白；(8)細(xì)胞周期蛋白相關(guān)基因。分別匯總闡述。在1例卵巢顆粒細(xì)胞瘤中，特異性上調(diào)的基因包括角蛋白17、胰島素樣生長因子、S100鈣結(jié)合蛋白A4、IL24、G蛋白、自嗜基因、鋅指蛋白以及3個(gè)EST(表達(dá)序列標(biāo)簽

6、)；在1例未成熟畸胎瘤中，層粘連蛋白和一種普遍存在的微管蛋白α的基因的表達(dá)明顯降低；卵巢上皮性癌癌旁組織2例中，特異性上調(diào)基因包括nm23-H8、類肝素酶、血影蛋白等。 3.用半定量RT-PCR驗(yàn)證了MMP9基因的表達(dá)特征與芯片檢測結(jié)果一致。 結(jié)論： 1.cDNA芯片技術(shù)可以快速、系統(tǒng)、準(zhǔn)確地揭示基因的表達(dá)特征，為研究卵巢癌的發(fā)生和進(jìn)展相關(guān)基因提供了良好工具。 2.通過研究正常卵巢和腫瘤之間、不同病理類型