山蒼子油抗申克孢子絲菌的實驗研究.pdf

1、目的：通過山蒼子油對申克孢子絲菌的體外抑菌試驗和體內(nèi)動物實驗，探討山蒼子油體外抗申克孢子絲菌的活性以及評價其灌胃治療實驗性小鼠皮膚孢子絲菌感染的療效，從而為山蒼子油的臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。此外，通過電鏡觀察山蒼子油作用前后申克孢子絲菌超微結(jié)構(gòu)的改變，了解其抗菌作用機(jī)理。 方法： 1.體外藥敏試驗 1．1 紙片擴(kuò)散法采用紙片擴(kuò)散法對山蒼子油體外抗申克孢子絲菌(包括我科臨床分離的皮膚固定型株和皮膚淋巴管型株各7株)的

2、活性進(jìn)行定性初篩。 1．2 微量液基稀釋法根據(jù)美國國家臨床試驗標(biāo)準(zhǔn)化委員會(NCCLS)發(fā)布的M27-A方案，分別檢測山蒼子油對皮膚固定型株和皮膚淋巴管型株孢子絲菌的最低抑菌濃度(MIC)，并以氟康唑作為質(zhì)控藥物。 2.體內(nèi)動物實驗 2．1小鼠皮膚感染申克孢子絲菌模型的制備將保存的皮膚固定型和皮膚淋巴管型申克孢子絲菌菌種(各 1 株)復(fù)溫，轉(zhuǎn)種在沙堡氏培養(yǎng)基上，27℃培養(yǎng) 10d，用無菌生理鹽水制備成菌懸液(

3、1×10<'8>cfu/ml)，通過皮下接種免疫抑制小鼠，分別建立固定型株和淋巴管型株申克孢子絲菌感染小鼠皮膚的動物模型。 2．2動物模型的檢測接種菌懸液4周后，通過小鼠皮損組織逆培養(yǎng)及組織病理切片等方法檢測小鼠皮膚孢子絲菌病造模是否成功。 2．3藥物治療將皮膚固定型株及皮膚淋巴管型株感染的小鼠分別隨機(jī)分為山蒼子油治療組、10％KI治療組及生理鹽水治療組(空白對照組)，以下簡稱山蒼子油固定組、KI固定組、空白固定組、山

4、蒼子油淋巴管組、KI淋巴管組及空白淋巴管組。其中山蒼子油灌胃量為83.53mg/kg，10％KI灌胃量為18ml/kg，生理鹽水灌胃量為0.2ml/次，均為1天1次，連續(xù)4周，治療之日起每日觀察小鼠皮損的變化情況。 3.電鏡觀察將MIC濃度的山蒼子油作用于申克孢子絲菌菌落，24 h后固定，另取未經(jīng)藥物作用的菌落作對照，常規(guī)制片后分別行掃描電鏡(SEM)和透射電鏡(TEM)觀察。 結(jié)論： 1.山蒼子油體外具有抗申