山蒼子油對(duì)小鼠白念珠菌陰道炎影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 本研究通過(guò)構(gòu)建白念珠菌陰道炎小鼠模型，觀察山蒼子油對(duì)白念珠菌陰道炎是否具有治療及止癢作用，并篩選出可以外用治療白念珠菌陰道炎的山蒼子油的濃度，為山蒼子油的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 1 白念珠菌陰道炎動(dòng)物模型的構(gòu)建：6周齡清潔級(jí)雌性昆明小鼠10只。于接種前6天開始隔日皮下注射1mg/ml苯甲酸雌二醇油劑0.1ml，使之處于假發(fā)情狀態(tài)，直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。在接種日，將密度為2.5×10<'6>cfu/ml的菌

2、懸液20μl(即白念珠菌孢子接種量為5×10<'4>cfu)，灌注入所有小鼠陰道內(nèi)。接種菌后的第2、第4天分別處死5只小鼠取陰道組織送組織病理學(xué)檢查。小鼠處死前均用拭子取樣涂片真菌鏡檢。 2 山蒼子油對(duì)小鼠陰道黏膜的刺激實(shí)驗(yàn)：6周齡清潔級(jí)雌性昆明小鼠50只，隨機(jī)分成5組，即Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組、Ⅳ組、Ⅴ組，每組10只。Ⅱ組、Ⅲ組、Ⅳ組、Ⅴ組分別給予4％、8％、12％、16％山蒼子油，Ⅰ組給予相同劑量生理鹽水。每天陰道內(nèi)給藥1次，每次

3、3μl，連續(xù)7天。給藥7天內(nèi)觀察小鼠的飲食、活動(dòng)、精神狀態(tài)、糞便等。末次給藥24小時(shí)后，處死動(dòng)物，取陰道組織送組織病理學(xué)檢查。 3 山蒼子油對(duì)白念珠菌陰道炎小鼠模型的治療作用實(shí)驗(yàn)：將造模成功的45只小鼠，隨機(jī)分為5組，即A組、B組、C組、D組、E組，每組9只。B組、C組、D組每日分別陰道內(nèi)給予4％、8％、12％山蒼子油1次，每次30μl，連續(xù)7天，A組給予同等劑量生理鹽水，E組給予同等劑量氟康唑溶液。分別于治療0天、5天、7天及

4、21天后，用5μlPBS液灌洗陰道8～10次。陰道灌洗液充分混勻后，進(jìn)行10倍系列稀釋。用20μl微量加樣器滴種于改良沙堡培養(yǎng)基平皿上，自高稀釋度滴種，每個(gè)稀釋度滴種3滴。37℃培養(yǎng)48小時(shí)，計(jì)數(shù)菌落形成單位(CFU)。 4止癢實(shí)驗(yàn)：清潔級(jí)健康豚鼠30只。實(shí)驗(yàn)前先將豚鼠右后足背剪毛，次日用粗砂紙擦傷右后足背去毛處，面積約1cm<'2>，隨機(jī)分為5組，即甲組、乙組、丙組、丁組、戊組，每組6只。乙組、丙組、丁組用藥分別為4％、8％、12％山

5、蒼子油1ml/只，甲組給予相同劑量生理鹽水，戊組給予丁酸氫化可的松乳膏0.05g/只，局部用藥30分鐘后，用0.05％磷酸組織胺5μl涂抹擦傷皮膚，3分鐘內(nèi)若豚鼠不出現(xiàn)舔擦傷皮膚動(dòng)作，重復(fù)操作，直至出現(xiàn)豚鼠回頭舔后足為止。以最后出現(xiàn)豚鼠回頭舔后足時(shí)所給予的磷酸組織胺總量為致癢閾，記錄涂抹磷酸組織胺的次數(shù)及用量。 應(yīng)用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。陰道灌洗液載菌量及磷酸組織胺致癢閾結(jié)果采用單因素方差

6、分析(Oneway Anova)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，P<0.05作為顯著性界限。 結(jié)果： 1 白念珠菌陰道炎動(dòng)物模型的構(gòu)建：造模后第2天，涂片真菌鏡檢可見大量孢子和陰道上皮細(xì)胞。組織病理切片中陰道壁黏膜淺層可見大量孢子。第4天，涂片真菌鏡檢可見較多假菌絲和芽生孢子，大量陰道上皮細(xì)胞。組織病理切片陰道壁黏膜淺層中可見大量假菌絲和孢子。 2 山蒼子油對(duì)小鼠陰道黏膜刺激實(shí)驗(yàn)：給藥7天內(nèi)，各濃度山蒼子油組小鼠的飲食、活動(dòng)、精神狀態(tài)、糞

7、便等均正常，無(wú)死亡現(xiàn)象，與生理鹽水組無(wú)明顯差異。組織病理學(xué)檢查結(jié)果：Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組、Ⅳ組4組小鼠陰道黏膜表皮層次清楚，均可見單層排列的柱狀基底細(xì)胞；黏膜下血管未見明顯擴(kuò)張、充血；結(jié)締組織輕度水腫；真皮內(nèi)少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)。Ⅴ組小鼠陰道黏膜表皮細(xì)胞內(nèi)水腫，棘層細(xì)胞明顯空泡樣變性，基底細(xì)胞液化變性；黏膜下血管明顯擴(kuò)張、充血；結(jié)締組織水腫；真皮內(nèi)較多炎細(xì)胞浸潤(rùn)。表明4％山蒼子油、8％山蒼子油、12％山蒼子油刺激性小，可以用于外用治療白念珠菌陰道

8、炎小鼠模型的實(shí)驗(yàn)研究；16％山蒼子油對(duì)小鼠陰道黏膜有明顯的刺激作用，不宜用于治療小鼠白念珠菌陰道炎。 3 山蒼子油對(duì)白念珠菌陰道炎小鼠模型的治療作用：用藥7天后，A組、B組、C組、D組及E組小鼠陰道灌洗液菌落計(jì)數(shù)分別為7.42±0.28、6.94±0.40、6.52±0.42、6.11±0.27、5.31±0.48。各個(gè)濃度山蒼子油均能降低陰道灌洗液菌落計(jì)數(shù)，與生理鹽水組比較有顯著性差異(P<0.05)。隨著山蒼子油治療濃度的增

9、高，菌落計(jì)數(shù)逐漸下降，且差異有顯著性(P<0.05)。 4止癢實(shí)驗(yàn)：各個(gè)濃度山蒼子油均能提高豚鼠對(duì)磷酸組織胺的致癢閾，與生理鹽水組比較有顯著性差異(P<0.05)。不同濃度的山蒼子油對(duì)磷酸組織胺致癢反應(yīng)的致癢閾隨藥物濃度的增加而明顯提高，且差異有顯著性(P<0.05)。 結(jié)論： 1 4％山蒼子油、8％山蒼子油及12％山蒼子油刺激性小，均可用于治療白念珠菌陰道炎。 2 山蒼子油外用對(duì)白念珠菌陰道炎具有一定的