半枝蓮瘤內(nèi)注射聯(lián)合反應(yīng)停治療肝癌的初步研究.pdf

1、原發(fā)性肝癌是世界上最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一。肝癌早期診斷率不高，手術(shù)切除率低，近年來(lái)肝癌研究中取得許多進(jìn)展，但總體預(yù)后仍然較差。大多數(shù)肝癌患者伴有肝炎背景、肝硬化及肝功能障礙，以致目前的介入治療作用有限。中醫(yī)中藥治療腫瘤是我國(guó)在腫瘤治療領(lǐng)域的一大特色，它不僅毒副作用小，而且作用途徑比較廣泛。半枝蓮為唇形科黃芩屬植物半枝蓮(SB)的干燥全草，有清熱利濕、解毒消腫、抗癌等功效，常用于治療肝臟疾病如肝炎、肝癌等。反應(yīng)停具有抗血管生成及免疫調(diào)節(jié)作用

2、，在肝癌的研究中也顯示了一定的抗腫瘤作用。 本課題通過(guò)BALB/C小鼠皮下接種肝癌H22建立移植瘤模型，采用半枝蓮乙醇提取液瘤內(nèi)注射聯(lián)合應(yīng)用反應(yīng)停治療小鼠肝癌，初步探討兩藥聯(lián)合治療肝癌的效果。 方法: 1.體外培養(yǎng)小鼠肝癌H22細(xì)胞，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞試驗(yàn)。 2.乙醇回流提取半枝蓮。 3.H22細(xì)胞隨機(jī)分為正常對(duì)照組，溶劑(1％乙醇)對(duì)照組和SB(0.125 mg/ml，0.25mg/ml，0.5

3、mg/ml，1.0 mg/ml原藥材濃度：溶于l％乙醇)治療組。采用MTT法檢測(cè)半枝蓮和1％乙醇對(duì)H22細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。Bliss法計(jì)算SB對(duì)H22細(xì)胞IC50值。 4.接種H22細(xì)胞于BAIB/C小鼠皮下建立肝癌H22的移植瘤模型。28只雄性BALB/C小鼠隨機(jī)分為4組，每組7只。 A組：反應(yīng)停50mg/kg/d灌胃D1-12； B組：SB lg/ml(原藥材濃度溶于1％乙醇)0.2～0.5ml瘤內(nèi)注射D6，8

4、，10，12； C組：SB.反應(yīng)停聯(lián)合用藥組，給藥方法分別與A、B組相同； D組：對(duì)照組，1％乙醇0.2～0.5ml.瘤內(nèi)注射D6，8，10，12。 自接種第四日起每日測(cè)腫瘤直徑，第12日處死小鼠，稱取瘤重。觀察腫瘤大小和瘤重比較抑瘤效果。 5.移植瘤采用抗CD31單抗做免疫組化染色，測(cè)定移植瘤組織微血管密度(MVD)。 結(jié)果: 1.體外試驗(yàn)，SB提取液對(duì)小鼠肝癌H22細(xì)胞增殖有較強(qiáng)的抑制

5、作用，且這種作用呈一定的劑量和時(shí)間依賴性。SB0.125mg/ml、0.25mg/ml、0.5mg/ml和1.0mg/ml處理H22細(xì)胞24h，細(xì)胞抑制率分別為(21.01±3.61)％、(25.71±4.52)％、(36.25±2.71)％和(52.12±0.49)％：處理48h，細(xì)胞抑制率分別為(32.77±1.96)％、(41.49±6.34)％、(55.17±4.10)％和(68.35±3.05)％；處理72h，細(xì)胞抑制率分別為

6、(35.43±6.55)％、(44.44±3.84)％、(58.91±8.71)％和(81.00±5.03)％，以上各組細(xì)胞抑制率與溶劑對(duì)照組相比均有顯著差異；溶劑(1％乙醇)對(duì)照組對(duì)H22細(xì)胞24h，48h和72h的抑制率分別為(4.71±3.86)％，(5.89±2.36)％和(3.57±0.28)％。1％乙醇處理組與正常對(duì)照組OD值的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)意義。SB處理24h、48h和72h的IC50分別為0.63 mg/ml，0.36 m

7、g/ml和0.30 mg/ml。 2.體內(nèi)試驗(yàn)，A組，B組，C組和D組瘤重分別(0.30±0.06)g(VScontrol)，(0.17±0.06)g(VS control)，(0.10±0.05)g(VScontrol)and(0.36±0.06)g。A組、C組之間瘤重差異有顯著統(tǒng)計(jì)意義。B組、C組之間差異有統(tǒng)計(jì)意義。A，B和C三組抑瘤率分別為18.11％，53.15％和71.65％；協(xié)同系數(shù)0.74。 3.A組，B組

8、，C組和D組的微血管計(jì)數(shù)MVC分別為(42.14±10.75)、(54.43±12.26)、(25.29±11.15)和(82.29±10.92)。三個(gè)治療組和D組之間比較有統(tǒng)計(jì)意義。SNK-q檢驗(yàn)顯示A組和B組之間差異不明顯。A組、B組分別與C組比較差異有統(tǒng)計(jì)意義。 結(jié)論： 1.結(jié)果表明半枝蓮瘤內(nèi)注射聯(lián)合應(yīng)用反應(yīng)停對(duì)小鼠H22肝癌移植瘤有較強(qiáng)的抑制作用。 2.半枝蓮和反應(yīng)停均有抗血管生成作用，且兩藥聯(lián)用對(duì)腫瘤微