大腸濕熱型潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型的建立及清腸湯對其的影響.pdf

1、目的： 本課題通過建立大腸濕熱型UC大鼠模型來研究清腸湯對大腸濕熱型UC的影響，深入揭示清腸湯治療大腸濕熱型UC的作用機(jī)制，為中醫(yī)藥治療大腸濕熱型UC提供一定的實驗基礎(chǔ)和理論依據(jù)。 方法： 將清潔級健康SD大鼠40只(雌雄各半)按雌雄隨機(jī)分為5組，分別為A組(正常對照組)、B組(模型組)、C組(SASP組)、D組(清腸湯常規(guī)劑量組)和E組(清腸湯大劑量組)，每組8只。采用葡聚糖硫酸鈉加乙酸配合飲食加環(huán)境復(fù)合法，復(fù)

2、制大鼠大腸濕熱型UC模型。造模完成后，對大鼠進(jìn)行藥物灌胃治療：正常組和模型組均以蒸餾水灌胃；清腸湯常規(guī)劑量組和清腸湯大劑量組分別給予不同劑量的清腸湯灌胃治療；SASP組用SASP混懸液灌胃治療，以上均給藥14d，于第15天禁食不禁水24小時后稱重，處死大鼠，迅速剖取結(jié)腸，自肛門2cm處向上取結(jié)腸6-8cm，沿腸系膜縱軸剪開腸腔，在每只大鼠結(jié)腸各取二小塊(3mm×3mm)結(jié)腸組織，一塊以4％甲醛固定，石蠟包埋、切片、HE染色，顯微鏡下觀察

3、各組結(jié)腸病理改變；免疫組化染色檢測結(jié)腸組織NF—kBp65和TLR4的表達(dá)。另一塊組織勻漿，放免法檢測細(xì)胞因子(TNF—α、IL-1β與IL-6)的含量。 結(jié)果： 1.清腸湯對大腸濕熱型UC大鼠結(jié)腸組織形態(tài)學(xué)影響結(jié)果顯示模型組結(jié)腸粘膜充血、水腫、彌漫性多發(fā)糜爛或潰瘍，鏡下粘膜固有膜內(nèi)有彌漫性炎癥細(xì)胞及中性粒細(xì)胞浸潤，隱窩有急性炎癥細(xì)胞浸潤等。清腸湯各劑量組和SASP組治療后，大鼠結(jié)腸粘膜輕度充血水腫，未見糜爛、潰瘍，鏡下

4、粘膜無潰瘍，粘膜固有層內(nèi)有少量淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞浸潤，結(jié)腸粘膜損傷大體觀與模型組比較有明顯差異。清腸湯能減輕大腸濕熱型UC大鼠結(jié)腸組織損傷，促進(jìn)病變組織修復(fù)，治療大腸濕熱型UC有效。 2.清腸湯對大腸濕熱型UC大鼠結(jié)腸粘膜損傷指數(shù)(CMDI)的影響結(jié)果顯示模型組大鼠結(jié)腸粘膜明顯充血水腫，糜爛出血，潰瘍形成，潰瘍直徑2-6mm不等。治療后，SASP、清腸湯常規(guī)劑量和清腸湯大劑量三組大鼠CMDI(分值)與正常對照組比較無明

5、顯差異(P＞0.05)；與模型組比較有顯著差異(P＜0.01)；清腸湯大劑量組大鼠結(jié)腸粘膜損傷指數(shù)與SASP組比較有顯著差異(P＜0.01)。 3.清腸湯對大腸濕熱型UC大鼠結(jié)腸組織細(xì)胞因子(TNF—α、IL-1與IL-6)表達(dá)的影響清腸湯各劑量組和SASP組治療后與模型組比較，結(jié)腸組織TNF—α、IL-1與IL-6含量均下降。說明中藥清腸湯具有降低促炎因子TNF—α、IL-1與IL-6表達(dá)，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，減輕結(jié)腸粘膜損害作

6、用。 4.清腸湯對大腸濕熱型UC大鼠腸組織NF—kBp65和TLR4表達(dá)的影響清腸湯各劑量組和SASP組治療后與模型組比較：大鼠結(jié)腸組織NF—kBp65和TLR4表達(dá)均下降；清腸湯大劑量組與SASP組比較有顯著性差異(P＜0.01)；清腸湯常規(guī)劑量組與SASP組比較無顯著性差異(P＞0.05)。說明清腸湯具有降低NF—kBp65和TLR4表達(dá)，從而減少細(xì)胞因子的分泌，減輕結(jié)腸粘膜損害的作用。 結(jié)論: 1.通過高糖

7、高脂飲食、高溫高濕環(huán)境和DSS加乙酸這種復(fù)合方法，可以較好地復(fù)制出具有大腸濕熱證特點的UC大鼠模型。 2.中藥清腸湯能夠改善大腸濕熱型UC大鼠的癥狀，減輕其結(jié)腸粘膜的炎性病理改變；在改善大鼠結(jié)腸粘膜損傷指數(shù)、降低大鼠結(jié)腸組織NF—KBp65和TLR4表達(dá)和減少細(xì)胞因子的分泌方面，中藥大劑量組優(yōu)于SASP組。 3.NF—kBp65、TLR4和細(xì)胞因子TNF—α、IL-1與IL-6可能參與了大腸濕熱型UC的發(fā)生、發(fā)展。清腸湯