中藥來源的擬神經(jīng)生長因子活性物質(zhì)的化學(xué)及生物學(xué)研究.pdf

1、老年性癡呆癥是一種嚴(yán)重威脅老年人健康的頑癥。目前上市的治療老年性癡呆癥的藥物僅僅起到緩解癥狀的作用,它仍是一個不能夠根治的頑疾。據(jù)報道,老年性癡呆癥的發(fā)病均與神經(jīng)細(xì)胞損傷和死亡相關(guān),而神經(jīng)生長因子(nervegrowthfactor,NGF)對神經(jīng)元的生長、存活以及功能維持具有重要的影響。由于NGF親水性強,分子質(zhì)量大,不能透過血腦屏障,限制了它在治療老年性癡呆癥中的應(yīng)用。因此,尋找類似于NGF活性,可以順利通過血腦屏障的具有擬神經(jīng)生長

2、因子活性的小分子化合物,已經(jīng)成為了研究熱點。
　　 本課題利用PC12細(xì)胞活性鑒定系統(tǒng),對上百種中藥粗提物進行篩選,發(fā)現(xiàn)麥冬、含羞草粗提物具有顯著地促進PC12細(xì)胞神經(jīng)突起伸長的活性。在活性跟蹤下,活性粗樣經(jīng)正、反相柱分離,多次HPLC純化后,從中分離得到23個活性化合物。此外,對雞樅活性組分進一步研究,發(fā)現(xiàn)了2個活性化合物。隨后,通過四大光譜分析和相關(guān)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)比對,鑒定了21個化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu),包括17個甾體皂苷類化合物,2個

3、腦苷脂類化合物,2個不飽和脂肪酸類化合物,其中新化合物有6個。其余由于含量微少且結(jié)構(gòu)復(fù)雜而難以鑒定。
　　 生物活性鑒定表明,從麥冬提取物中分離得到的甾體皂苷類化合物均具有擬神經(jīng)生長因子活性,其中以麥冬皂苷D的活性最好。為了深入構(gòu)效研究,選取含量高、活性好的麥冬皂苷D進行水解反應(yīng),得到魯斯可皂苷元。活性結(jié)果顯示,麥冬皂苷D和魯斯可皂苷元對PC12細(xì)胞的神經(jīng)突起分化率相近。目前實驗結(jié)果表明,甾體皂苷能夠引起PC12細(xì)胞神經(jīng)突起伸長

4、,而糖的種類、個數(shù)和連接方式對活性影響不顯著。隨后,初步探討了P13K和MEK/ERK的抑制劑對甾體皂苷誘導(dǎo)PC12細(xì)胞神經(jīng)突起伸長的抑制作用。研究發(fā)現(xiàn),加入PI3K的抑制劑LY294002和MEK/ERK的抑制劑PD98059后,麥冬皂苷D誘導(dǎo)的。PC12細(xì)胞神經(jīng)突起伸長現(xiàn)象基本受到抑制。此外,本課題組研究發(fā)現(xiàn)甾類化合物具有顯著地抗衰老活性,因而通過抗衰老的體外酵母模型,研究了甾體皂苷在酵母水平上的抗衰老活性和作用機理。研究表明,SO

5、D1,SOD2和uth1基因在甾體皂苷的抗衰老活性上有著重要作用。
　　 本課題對雞樅活性組分進行了深入研究,發(fā)現(xiàn)腦苷脂類化合物具有擬神經(jīng)生長因子活性。該類化合物具有新穎的結(jié)構(gòu),其結(jié)構(gòu)特征是LCB長鏈C-9位上的羥基化。生物活性鑒定表明,腦苷脂類活性化合物的脂肪碳鏈的長度對活性影響顯著。隨后,初步探討了該類化合物的生物活性作用機理。結(jié)果表明,腦苷脂類化合物誘導(dǎo)PC12細(xì)胞分化的信號通路可能與P13K途徑、MEK/ERK途徑、PK