基于苷元特征顯色檢測(cè)苜蓿總皂苷的研究.pdf

1、本文首先以提取率為考察指標(biāo)，利用響應(yīng)面分析優(yōu)化了提取苜蓿皂苷的工藝條件；以大孔吸附樹(shù)脂AB-8和陽(yáng)離子交換樹(shù)脂聯(lián)用富集、純化總皂苷類(lèi)成分；用制備高效液相色譜法分離出一種皂苷單體并用ESI/MS法分析確證其結(jié)構(gòu)；在此基礎(chǔ)上，系統(tǒng)地研究了基于苜蓿皂苷苷元比色法測(cè)定苜?？傇碥蘸康姆椒?。其研究的主要結(jié)果如下： 研究和比較了2種不同的TAS提取方法，（1）以乙醇溶液為溶劑，通過(guò)對(duì)影響萃取效果的單因素分析，建立響應(yīng)面分析實(shí)驗(yàn)，優(yōu)化提取工藝

2、條件。最佳提取條件為：提取溫度45 ℃、提取時(shí)間154 min、液料比(ml/ g)=10:1、乙醇濃度63％，提取1次，提取率為78.7％。（2）超聲法提取TAS，結(jié)果表明：用20 kHz超聲波提取60 min，提取率為97.41％。這種方法的提取率與加熱攪拌提取2次（合計(jì)提取時(shí)間240 min）的皂苷提取率基本相等。 脫脂苜蓿根粉的醇提液中含有糖類(lèi)物質(zhì)和色素，采用大孔樹(shù)脂吸附和陽(yáng)離子交換樹(shù)脂去除提取液中的雜質(zhì)物質(zhì)。實(shí)驗(yàn)確定A

3、B-8樹(shù)脂的吸附條件為：溶液pH為8～9、NaCl濃度為0.80％、苜蓿皂苷溶液的初始濃度以8 mg/ml為宜、上樣流速為3 BV/h、洗脫液為95％的乙醇。收集洗脫液并減壓蒸干后，溶在15％的甲醇中，然后過(guò)陽(yáng)離子交換柱脫色。TLC鑒定結(jié)果表明，純化后的產(chǎn)品中含有苜蓿皂苷類(lèi)成分純度高。 以制備高效液相色譜法從脫脂苜蓿根粉乙醇提取并經(jīng)過(guò)上述分離初步純化的粗提物中分離出一種皂苷單體，通過(guò)ESI/MS分析確證其結(jié)構(gòu)為3-O-[β-

4、D-glucopyranosyl]-28-O-[β-D-xylopyranosyl(1→4)-α-L-rhamnopyranosyl(1→2)-α-L-arabinopyranoside] medicagenate。 建立了利用皂苷元特征顯色測(cè)定苜蓿皂苷含量的定量方法。以香草醛-高氯酸為顯色劑，冰醋酸為溶劑，使皂苷元顯色，用分光光度法在波長(zhǎng)為560 nm處測(cè)定苜蓿皂苷元的含量。以3-O-[β-D-glucopyranosyl]-