X射線照射對(duì)臍血淋巴細(xì)胞增殖和NK細(xì)胞活性的影響.pdf

1、中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文X射線照射對(duì)臍血淋巴細(xì)胞增殖和NK細(xì)胞活性的影響姓名：孫德宇申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：李光20030401(Hyclone)洗滌2次，最后加入含10％胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液，計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞濃度。1(1)臍血淋巴細(xì)胞增殖的測(cè)量取已分離的單個(gè)核細(xì)胞，調(diào)至細(xì)胞濃度1Xi06／ml，以10彬IIlI刀豆蛋白A(ConA)刺激增殖，37℃，5％C02，飽和濕度條件下培養(yǎng)24小時(shí)。接受不同劑量(O25

2、Gy，O5Gy，1Gy，2Gy，4Gy，6Gy，8Gy，16Gy)x射線照射。照射后立即置于96孔培養(yǎng)板，取4個(gè)平行樣本，每孔加1001d，繼續(xù)培養(yǎng)56小時(shí)后加3H—TdR(1tLCi／孔)再培養(yǎng)8小時(shí)后用多頭細(xì)胞收集器收集細(xì)胞，置于49型玻璃纖維膜上，靜置過夜，將干燥的濾紙加入液爍瓶中，用Beckman液體閃爍計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)放射性核素每分鐘閃爍數(shù)(CPM值)。淋巴細(xì)胞的增殖反應(yīng)用刺激指數(shù)(SI)評(píng)價(jià)，SI=實(shí)驗(yàn)孔CPM均值／對(duì)照孔CPM均

3、值，通常SI／2即有意義。(2)臍血NK細(xì)胞活性的測(cè)量①取傳代培養(yǎng)48小時(shí)的K562細(xì)胞為靶細(xì)胞，臺(tái)盼藍(lán)拒染試驗(yàn)測(cè)定細(xì)胞活力，應(yīng)達(dá)到98％以上。調(diào)整濃度1X106／ml，加入3H—TdR(10txCi／m1)37℃，5％C02，飽和濕度條件下培養(yǎng)，孵育6小時(shí)，洗滌2次去除游離的3H—TdR，再制備成5X105／ml細(xì)胞懸液備用。②臍血單個(gè)核細(xì)胞洗滌2次后，調(diào)整細(xì)胞濃度為1107／ml作為效應(yīng)細(xì)胞(效靶比20：1)，予以上述不同劑量x射線