高壓氧治療早老性癡呆模型大鼠的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：驗(yàn)證大鼠腦海馬區(qū)注射Aβ25-35建立AD模型的可行性和可重復(fù)性；觀察高壓氧(hyperbaric oxygen，HBO)療法對(duì)AD大鼠行為學(xué)的影響；觀察HBO療法對(duì)AD大鼠腦海馬區(qū)神經(jīng)元形態(tài)學(xué)的影響；檢測(cè)HBO對(duì)AD大鼠海馬腦組織內(nèi)SOD和MDA的影響；檢測(cè)HBO對(duì)AD大鼠海馬腦組織GFAP表達(dá)的影響；檢測(cè)HBO對(duì)AD大鼠海馬腦組織Bcl-2和Bax mRNA表達(dá)的影響。
　　方法：SD大鼠雙側(cè)大腦海馬區(qū)分別注射5μl(1

2、μg/μl)Aβ25-35建立AD大鼠模型。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為正常對(duì)照組、假手術(shù)組、模型對(duì)照組和HBO組，各組均為12只大鼠。正常對(duì)照組不注射任何物質(zhì)，假手術(shù)組大鼠雙側(cè)大腦海馬區(qū)注射等量生理鹽水。造模后一周進(jìn)行Morris水迷宮行為學(xué)試驗(yàn)，記錄平均逃避潛伏期和90s內(nèi)跨越平臺(tái)次數(shù)，用以測(cè)量大鼠對(duì)水迷宮的學(xué)習(xí)和記憶獲取能力以及對(duì)平臺(tái)空間位置的記憶保持能力，從而判斷造模效果。干預(yù)方法：2ATA純氧，每天一次，每次吸氧60min，10d一療程，共兩

3、個(gè)療程。HBO結(jié)束后大鼠進(jìn)行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)，觀察治療效果。實(shí)驗(yàn)終期處死動(dòng)物進(jìn)行大鼠海馬腦組織HE病理學(xué)觀察；用羥胺法測(cè)定大鼠海馬腦組織SOD活性；用硫代巴比妥酸反應(yīng)法檢測(cè)大鼠海馬腦組織MDA的含量；用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)各組大鼠海馬腦組織GFAP的表達(dá)；用RT-PCR檢測(cè)各組大鼠海馬腦組織Bcl-2和Bax mRNA的相對(duì)表達(dá)量。
　　結(jié)果：(一)Morris水迷宮試驗(yàn)結(jié)果
　　造模后Morris水迷宮結(jié)果顯示，模型

4、對(duì)照組較假手術(shù)組和正常對(duì)照組平均逃避潛伏期延長(zhǎng)，90s內(nèi)跨越平臺(tái)位置次數(shù)明顯減少(P<0.05)，且多圍繞池壁游泳，較少游向原平臺(tái)附近，其運(yùn)動(dòng)軌跡隨機(jī)分布于各象限中。行為學(xué)試驗(yàn)結(jié)果提示造模成功。
　　HBO干預(yù)后Morris水迷宮結(jié)果顯示，HBO組較模型對(duì)照組平均逃避潛伏期明顯縮短，90s內(nèi)跨越平臺(tái)次數(shù)明顯增加(P<0.05)，HBO組較假手術(shù)組和正常對(duì)照組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。行為學(xué)試驗(yàn)結(jié)果提示：HBO治療能改

5、善AD大鼠的學(xué)習(xí)和記憶能力。
　　(二)大鼠海馬腦組織病理學(xué)觀察結(jié)果
　　大鼠腦組織HE染色，光鏡觀察顯示，正常對(duì)照組及假手術(shù)組腦海馬神經(jīng)元排列整齊，呈圓形或橢圓形，淡紫藍(lán)色，著色均勻。模型對(duì)照組腦海馬神經(jīng)元排列紊亂，胞漿濃縮，胞核固縮，呈不規(guī)則齒狀形態(tài)，整個(gè)細(xì)胞深染成紫色。HBO組腦海馬神經(jīng)元排列整齊，胞核、核仁清晰，散在分布個(gè)別濃染、皺縮的神經(jīng)元。
　　(三)大鼠海馬腦組織SOD和MDA檢測(cè)結(jié)果
　　HBO組

6、腦海馬組織SOD活性較模型對(duì)照組明顯上升(P<0.05)，而MDA含量則明顯下降(P<0.05)。HBO組與正常對(duì)照組及假手術(shù)組相比，無(wú)顯著性差異(P>0.05)。提示在一定氧分壓范圍內(nèi)，HBO能夠提高機(jī)體自由基清除酶的活力。
　　(四)各組大鼠海馬腦組織GFAP免疫組化結(jié)果
　　HBO組較模型對(duì)照組相比，GFAP表達(dá)下調(diào)(P<0.05)，HBO組與正常對(duì)照組及假手術(shù)組相比，無(wú)顯著性差異(P>0.05)。提示HBO能下調(diào)AD

7、大鼠海馬腦組織GFAP的表達(dá)。
　　(五)各組大鼠海馬腦組織Bcl-2和Bax mRNA相對(duì)表達(dá)量的結(jié)果
　　HBO組Bcl-2 mRNA表達(dá)較模型對(duì)照組相比顯著上調(diào)(P<0.05)，而B(niǎo)ax的mRNA表達(dá)則明顯下調(diào)(P<0.05)。提示HBO能夠上調(diào)AD大鼠的抗凋亡基因的表達(dá)，下調(diào)凋亡基因的表達(dá)。
　　結(jié)論：Aβ25-35誘導(dǎo)的AD大鼠模型能夠較好的模擬AD的行為學(xué)和病理學(xué)改變，是一種較為理想的AD模型，可行性和可重