E-cadherin在激素非依賴性前列腺癌中的影響及意義.pdf

1、目的:
　　 通過實驗探討E_cadherin在激素非依賴性前列腺癌上的表達及基因啟動子CpG島甲基化情況，并探討甲基化抑制劑5-氮雜-2＇-脫氧胞苷對激素非依賴性前列腺痛細胞的影響及意義。
　　 方法:
　　 從國內大型細胞庫購買人前列腺癌細胞株和正常人前列腺上皮細胞株，進行細胞培養(yǎng)。實驗分3組：(1)正常對照組：正常人前列腺上皮細胞株RWPE-1;(2)對照組：激素依賴性前列腺癌細胞株LnCaP;(3)實驗組

2、：激素非依賴性前列腺癌細胞株PC-3。用MSP(甲基化特異性PCR)方法檢測5-氮雜-2＇-脫氧胞苷作用前后三種細胞的E_cadherin基因啟動子CpG島的甲基化情況；用RT-PCR方法檢測5-氮雜-2＇-脫氧胞苷作用前后這三種細胞的E_cadherin mRNA轉錄情況；再用Westernblot技術檢測相應的E_cadherin蛋白水平上的表達。比較各組細胞E_cadherin表達的差異，以及在蛋白質及mRNA水平上的相關性。最后

3、用Transwell小室檢測5-氮雜-2＇-脫氧胞苷作用后癌細胞侵襲性的改變。并進行統(tǒng)計分析。
　　 結果:
　　 1．MSP結果顯示：正常人前列腺上皮細胞RWPE-1呈甲基化陰性，非甲基化強陽性；LnCaP細胞的甲基化及非甲基化均呈陽性；PC-3細胞呈甲基化強陽性，非甲基化陰性。使用含有濃度為10μmol/L的5-氮雜-2＇-脫氧胞苷培養(yǎng)基分別培養(yǎng)72小時之后，正常前列腺上皮細胞仍呈甲基化陰性，非甲基化強陽性；LnCa

4、P細胞的甲基化較前減弱，非甲基化增強；PC-3細胞的甲基化程度明顯減弱，并出現較強的非甲基化。
　　 2．RT-PCR結果顯示：E_cadherin mRNA水平存在差異，在正常人前列腺上皮細胞表達水平最高，且隨著藥物作用濃度的增加和作用時間的延長，其mRNA未發(fā)現明顯改變。LnCaP細胞中的E_cadherin mRNA水平次之，而PC-3細胞則幾乎不表達；同時，其mRNA的表達隨著藥物濃度的增加和作用時間的延長而逐漸增強，其

5、中又以PC-3細胞中增強最為明顯。
　　 3．Western blot結果顯示：E_cadherin蛋白表達情況與mRNA表達結果相一致。正常人前列腺上皮細胞隨著藥物濃度的增加和作用時間的延長，E_cadherin蛋白未發(fā)現明顯改變。LnCaP細胞及PC-3細胞E_cadherin蛋白的表達隨著藥物濃度的增加和作用時間的延長而逐漸增強，其中PC-3細胞表現更為明顯。
　　 4．侵襲性實驗結果顯示：正常人前列腺上皮細胞未發(fā)

6、現侵襲性，PC-3細胞的侵襲性明顯高于LnCaP細胞。分別加入濃度為10μmol/L的5-氮雜-2＇-脫氧胞苷作用72小時之后，LnCaP細胞的侵襲性下降，PC-3細胞的侵襲性明顯下降。
　　 結論:
　　 1．激素非依賴性前列腺癌的E_cadherin基因啟動子CpG島存在明顯的甲基化，E_cadherin的表達缺失。
　　 2．5-氮雜-2＇-脫氧胞苷可降低激素非依賴性前列腺痛的啟動子甲基化程度，并促進E_c