髓系及非髓系TLR4對糖尿病視網(wǎng)膜病變的影響的研究.pdf

1、【目的】探討髓系及非髓系細胞來源的Toll樣受體4(toll-likereceptor4,TLR4)在糖尿病視網(wǎng)膜的表達及對糖尿病視網(wǎng)膜病變(Diabeticretinopathy,DR)的影響。
　　【方法】取12周齡的雄性TLR4基因突變小鼠C3H/HeJ(Mut)及相應野生型小鼠C3H/HeN(WT),制備骨髓移植嵌合體模型,用兩種純合體小鼠作自身移植對照(按骨髓供體至受體分組記為WT/Mut,Mut/WT,WT/WT,Mu

2、t/Mut),一月后用鏈脲佐菌素(STZ,200mg/Kg)建立糖尿病動物模型,另取未做處理小鼠做空白對照(記為N組),于糖尿病模型建成一個月、兩個月、四個月后取材,電鏡觀察小鼠視網(wǎng)膜組織超微結構的變化,免疫組化染色觀察細胞間粘附分子1(ICAM-1)在視網(wǎng)膜組織的表達,RT-PCR檢測視網(wǎng)膜TLR4及巨噬細胞炎性蛋白2(MIP-2)mRNA的表達,ELISA檢測血清中MIP-2、腫瘤壞死因子a(TNF-a)的濃度并測血清丙二醛(MDA

3、)的濃度。
　　【結果】超微電鏡顯示,糖尿病一月時小鼠視網(wǎng)膜組織即有神經(jīng)節(jié)細胞及神經(jīng)纖維水腫,核周間隙增寬,核固縮,胞漿顏色變淡,兩月時毛細血管內(nèi)皮細胞胞漿線粒體水腫,嵴變短,管腔狹窄,周細胞水腫,各模型組間損傷程度相比,以WT/WT組最重,Mut/Mut組最輕,WT/Mut組重于Mut/WT組;免疫組化定位ICAM-1顯示,ICAM-1染色在空白組視網(wǎng)膜內(nèi)顆粒層及節(jié)細胞層呈微黃色,糖尿病一月時視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞呈棕黃色陽性表達,兩

4、月時染色呈褐色強陽性表達,并且新生毛細血管管壁呈陽性表達,各模型組間表達強度相比,以WT/WT組強于Mut/Mut組,WT/Mut組強于Mut/WT組;視網(wǎng)膜組織RT-PCR結果顯示,各模型組TLR4及MIP-2的mRNA的表達在糖尿病一月、兩月、四月時依次上調(diào),各模型組間相比,mRNA的表達由高至低依次為WT/WT、WT/Mut、Mut/WT、Mut/Mut組(P<0.05);血清ELISA結果顯示,各模型組TNF-a、MIP-2及M

5、DA濃度在糖尿病一月、兩月、四月時依次上升,均高于空白對照組,各模型組間相比,濃度由高至低依次為WT/WT、WT/Mut、Mut/WT、Mut/Mut組(P<0.05)。
　　【結論】糖尿病視網(wǎng)膜病變隨病程發(fā)展而加重,神經(jīng)病變早于微血管病變;TLR4基因突變減輕糖尿病小鼠視網(wǎng)膜病變;髓系及非髓系來源的TLR4基因表達產(chǎn)物均對DR的病程發(fā)展有影響;并且髓系來源的TLR4基因表達產(chǎn)物相對于內(nèi)皮系來源的表達產(chǎn)物對DR的影響更為顯著,主要