Graves病甲狀腺組織中Th-,1--Th-,2-類細(xì)胞因子基因的表達(dá).pdf

1、目的；Graves病(gravesdisease,簡(jiǎn)稱GD)又稱毒性彌漫性甲狀腺腫或Basedow病，是一種常見的自身免疫性疾病(AITD)，病變部位主要發(fā)生在甲狀腺器官上，屬于涉及細(xì)胞免疫和體液免疫紊亂的器官特異性自身免疫病。本病的病因和發(fā)病機(jī)制尚未完全明確。近年來，輔助性T細(xì)胞Th1/Th2亞群的區(qū)分極大地提高了人們對(duì)細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)的認(rèn)識(shí)，機(jī)體Th1/Th2平衡狀態(tài)失調(diào)與腫瘤免疫逃逸，細(xì)菌、病毒等微生物感染有一定關(guān)系，并參與變態(tài)免疫性

2、疾病、自身免疫性疾病如Graves病的發(fā)生。細(xì)胞因子作為一組重要的免疫介質(zhì)，能夠廣泛的調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能，而且對(duì)甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞亦產(chǎn)生重要的影響(1)。另一方面，他們又可以通過改變免疫活性細(xì)胞和甲狀腺細(xì)胞的某些功能狀態(tài)直接或間接參與自身免疫性甲狀腺疾病(AITD)的發(fā)生和發(fā)展。已經(jīng)證實(shí)，Graves病存在著免疫功能的紊亂，但是究竟以細(xì)胞免疫為主，還是以體液免疫為主，，即是以Th1類細(xì)胞因子表達(dá)為主，還是以Th2類細(xì)胞因子表達(dá)為主，換言

3、之，是否存在著漂移現(xiàn)象?為回答上述問題，本研究選擇IFN-γ、TNF-α、IL-2代表Th1類細(xì)胞因子，IL-4、IL-6、IL-10代表Th2類細(xì)胞因子，應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法分別檢測(cè)了Graves病患者和正常人甲狀腺組織細(xì)胞中細(xì)胞因子的表達(dá)模式，并同時(shí)檢測(cè)血清中TNF-α，IL-2，IL-6細(xì)胞因子的水平及于甲狀腺功能指標(biāo)的關(guān)系，探討其發(fā)病與Th1/Th2類細(xì)胞因子的表達(dá)關(guān)系。明確Graves病的Th1/Th2

4、相關(guān)細(xì)胞因子群譜的特征。 方法；所有研究對(duì)象根據(jù)病史和輔助檢查分為2個(gè)大組：GD組：選擇初診的GD患者22例，均未用過甲狀腺藥物或放射性131I治療，男性10例，女性12例，平均年齡35(19～53)歲。正常對(duì)照組：25例，男性12人，女性13人，平均年齡34(25～46)歲，為孤立性甲狀腺腺瘤或甲狀腺囊腫手術(shù)患者的病變旁正常甲狀腺組織(甲狀腺囊腫14例，孤立性甲狀腺腺瘤11例)，甲狀腺功能(TT3、TT4、FT3、FT4、sT

5、SH)和其他規(guī)定的輔助檢查正常，診斷及正常甲狀腺組織經(jīng)病理確診。從組織提取總RNA，并采用逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)分析方法檢測(cè)IFN-γ、TNF-α，IL-2、IL-4、IL-6、IL-10等6種細(xì)胞因子的mRNA轉(zhuǎn)錄。并采用ELISA方法對(duì)所有對(duì)象的血清中細(xì)胞因子TNF-α、IL-2、IL-6水平檢測(cè)，甲狀腺功能TT3、TT4、FT3，F(xiàn)T4和sTSH用放射免疫法測(cè)定。結(jié)果的比較成組t檢驗(yàn)，四格表的確切概率法，直線相關(guān)進(jìn)行

6、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。 結(jié)果；正常對(duì)照組Th1/Th2類細(xì)胞因子的基因轉(zhuǎn)錄的檢測(cè)中，所有25名健康者IFN-γ、IFN-α、IL-2、IL-4、IL-10均無轉(zhuǎn)錄，僅有2名轉(zhuǎn)錄IL-6。與正常對(duì)照組比較，GD組細(xì)胞因子的基因轉(zhuǎn)錄檢出率為36.36％，較正常對(duì)照組細(xì)胞因子表達(dá)率1.33％明顯增高(P＜0.01)；在GD組，Th2細(xì)胞因子(IL-4、IL-6)的基因轉(zhuǎn)錄檢出率為53.03％，明顯高于Th1類細(xì)胞因子(IFN-γ、TNF-α，I

7、L-2)的基因轉(zhuǎn)錄檢出率19.70％，差異具有顯著性(P＜0.01)。由此說明，正常甲狀腺組織亦可少量的表達(dá)IL-6，但在病理?xiàng)l件下，可異常的產(chǎn)生IL-4、IL-6在內(nèi)的多種細(xì)胞因子，且Graves病患者Th1相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)率明顯低于Th2相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)率。 血清細(xì)胞因子ELISA檢測(cè)結(jié)果也相應(yīng)顯示，GD患者血清中Th1類細(xì)胞因子IL-2值11.75±0.96pg/ml均明顯低于正常對(duì)照組14.54±1.27pg/ml，

8、GD組與正常對(duì)照組比較，(P＜0.01)，有顯著性差異。Th2類細(xì)胞因子IL-6的血清水平166.87±26.12pg/ml則明顯高于正常對(duì)照組96.79±29.72pg/ml，差異具有顯著性(P＜0.05)。兩實(shí)驗(yàn)結(jié)果成對(duì)應(yīng)表達(dá)，顯示向Th2細(xì)胞因子方向偏移。 此外，細(xì)胞因子間的關(guān)系也很復(fù)雜，IL-6與TNF-α呈有意義直線正相關(guān)(r=0.412,P＜0.05)，并且與FT3、FT4、TT3、TT4呈有意義正相關(guān)(P＜0.05

9、～0.01)，與IL-2呈顯著直線負(fù)相關(guān)(r=-0.631,P＜0.01)。TNF-α與IL-2無直線負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.298,P＞0.05)。細(xì)胞因子與甲狀腺功能的關(guān)系為：IL-6與TT3、TT4、FT3、FT4均呈直線正相關(guān)，(分別為r=0.481，P＜0.01；r=0.522，P＜0.01；r=0.468，P＜0.05；r=0.37，P＜0.05)，與sTSH呈直線負(fù)相關(guān)(r=-0.396，P＜0.05)。IL-2與TT3、T

10、T4、FT3、FT4均呈直線負(fù)相關(guān)(r=-0.476，P＜0.01；r=-0.491，P＜0.01；r=0.426，P＜0.05；r=-0.401,P＜0.05)與sTSH呈直線正相關(guān)(r=0.352P＜0.05)。TNF-α與FT3、FT4、TT3、TT4、sTSH無明顯相關(guān)關(guān)系，表明細(xì)胞因子的產(chǎn)生和分泌是受到多種調(diào)節(jié)機(jī)制的影響，其有復(fù)雜的調(diào)節(jié)甲狀腺的機(jī)制。 結(jié)論；1、Graves病患者甲狀腺細(xì)胞中細(xì)胞因子的表達(dá)模式有異于正常