禹白附和虎掌南星刺激性毒性成分的研究.pdf

1、本課題來源于“十一五”國家科技支撐計劃項目(編號：2006BAI09806-10)。禹白附、天南星與半夏同屬于天南星科植物，也都是以復(fù)制法炮制的幾種常用有毒藥材；本文在本課題組前期對半夏的炮制減毒機理研究基礎(chǔ)上，對禹白附和天南星(虎掌南星)的刺激性毒性成分進行了研究。研究表明禹白附、虎掌南星的刺激性毒性與半夏類似，兩種有毒中藥中所含有的草酸鈣針晶為其主要刺激性毒性成分，明礬是炮制解毒的主要輔料，解毒機制是使得毒針晶的晶型破壞。主要內(nèi)容如

2、下：
　　 1.文獻研究
　　 通過查閱國內(nèi)外文獻，就禹白附和天南星的化學(xué)成分、藥理毒理作用、炮制研究概況作了綜述。文獻研究表明禹白附和天南星的毒性都主要表現(xiàn)在對黏膜組織的刺激性，但何為刺激性毒性成分尚無定論。
　　 2.藥材刺激性毒性成分的初步確定：
　　 鑒于有關(guān)禹白附的研究報告較少，特別是在化學(xué)成分研究方面。本論文首先采用成分預(yù)試的方法檢測到禹白附藥材主要含有生物堿、有機酸、揮發(fā)油、糖苷、甾體類等成

3、分；并從禹白附中提取分離了揮發(fā)油和含量較高的有機酸部位，進行了GC-MS分析。
　　 以水和各有機溶劑分別制備禹白附與虎掌南星生藥材的提取物，同時提取藥材針晶，經(jīng)家兔眼刺激性試驗表明：藥材水及各有機溶劑提取物(各提取液經(jīng)鏡檢均無針晶)、水溶性蛋白及禹白附揮發(fā)油、草酸鈣化學(xué)對照品都沒有刺激性；而與空白對照組比較，藥材生品粉末和各溶劑提取后的藥材殘渣對家兔眼結(jié)膜的刺激有顯著性差異，所提取的針晶的刺激性有極其顯著性差異。據(jù)此，初步確定

4、藥材含有的特殊晶型的針晶為其主要刺激性成分。
　　 3.藥材針晶的鑒定及含量測定：
　　 所提取的禹白附和虎掌南星針晶經(jīng)X-射線衍射分析，均鑒定為單斜晶系的CaC2O4.H2O晶體。掃描電鏡觀察明顯可見銳利的針尖、晶體表面的凹槽及倒刺結(jié)構(gòu)，推測這種特殊的晶型可能是其刺激性的物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　 建立了間接測定草酸鈣針晶含量的RP-HPLC法，測得禹白附和虎掌南星生品中的草酸鈣針晶含量分別為0.58％和1.55％。

5、r>　　 4.藥材與針晶的刺激性毒性作用研究：
　　 小鼠腸系膜試驗表明腹腔注射藥材生品、針晶混懸液，均有大量針晶刺入小鼠腸系膜，腸系膜組織細(xì)胞腫脹；家兔眼刺激性試驗結(jié)果表明，刺激性作用隨著針晶濃度的增大而增強，刺激性強度和針晶量之間呈現(xiàn)出良好的相關(guān)性；急性毒性試驗結(jié)果也表明，針晶對小鼠腹腔注射的LD50值遠(yuǎn)小于藥材生品粉末的LD50。兩種藥材針晶腹腔注射產(chǎn)生的毒性均分別是其生品的近200倍，說明兩種藥材中確實具有很強的刺激性

6、毒性，是兩種有毒藥材的主要刺激性毒性成分。
　　 所提藥材針晶的Biuret反應(yīng)呈陽性，表明針晶中除草酸鈣以外還含有蛋白類成分。經(jīng)純化凍干提取分離針晶蛋白，進行家兔眼刺激試驗并與藥材水溶性蛋白對照，結(jié)果表明針晶結(jié)合蛋白具有一定刺激性；豚鼠皮膚刺激性試驗表明針晶蛋白對破損皮膚有強刺激性；以SDS-PAGE(十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳)法考察藥材針晶蛋白與水溶性蛋白的異同，結(jié)果表明在同等條件下針晶蛋白在20～66KD有幾條譜

7、帶是水溶性蛋白所沒有的。推測針晶蛋白的特殊譜帶所對應(yīng)的蛋白可能是針晶蛋白產(chǎn)生刺激性的主要組分。
　　 5.藥材白礬炮制減毒機理的初步探討
　　 鑒于禹白附和天南星均用白礬(明礬)以復(fù)制法炮制，取兩種藥材針晶分別以8％的白礬溶液浸泡，結(jié)果發(fā)現(xiàn)針晶數(shù)量下降，且均有溶蝕、斷截的形態(tài)變化，對家兔眼結(jié)膜的刺激性也大為降低。因此認(rèn)為刺激性毒性成分的炮制減毒機理在于：藥材經(jīng)炮制后，主要由于白礬的作用使得藥材所含有的草酸鈣針晶的特殊晶型