新型抗EGFR單抗藥物的臨床免疫學研究.pdf

1、Cetuximab(西妥昔單抗,又稱C225單抗)是用于轉移性結直腸癌和頭頸鱗狀細胞癌治療的抗EGFR單克隆抗體,于2004年被美國FDA批準上市(商品名Erbitux(R))。盡管該藥在臨床治療中顯示出良好的療效,但臨床超敏反應發(fā)生率很高,主要原因是該抗體作為糖蛋白,寡糖鏈中含有大量的Gal-α(1,3)-Gal(α-Gal)結構。Α-Gal在正常人體蛋白的N糖基化修飾中不存在,人多產(chǎn)生于鼠源細胞系,可引發(fā)藥物特異性IgE抗體介導的超

2、敏反應。本研究中,我們設計不同培養(yǎng)工藝并采用不同于Erbitux(R)的表達系統(tǒng)(CHO表達系統(tǒng))成功制備出具有不同糖形結構的抗EGFR基因工程抗體(cMAB009單抗),由于該抗體的聚糖結構中不含有α-Gal,因此不會引發(fā)藥物特異性IgE抗體介導的超敏反應,具有較Erbitux(R)單抗更好的臨床安全性。
　　本課題應用液相色譜-電噴霧離子化四極桿飛行時間質譜技術(LC-ESI-Q-Tof),通過交替高低碰撞能量掃描,源內誘導解

3、離及二級質譜的方法分別從完整蛋白亞單位水平,酶解糖肽水平,釋放的寡聚糖水平研究聚糖結構,對比分析CMAB009單抗和Erbitux(R),結合外切糖苷酶逐級消化的方法對兩種蛋白的糖鏈結構作進一步確證分析;通過Ⅰ期人體臨床研究,采用NCICTC標準評價CMAB009單抗在人體的臨床耐受性,采用流式競爭法檢測受試者血清的血藥濃度后通過WNL不同模型擬合進行藥代動力學的分析,采用RECIST標準進行初步療效評價;進一步通過臨床采集的大樣本受試

4、者血清,利用生物薄膜光學干涉(BL1)和ELISA的方法檢測并分析CMAB009單抗的免疫原性。
　　分析結果表明,與Erbitux(R)單抗相比,CMAB009單抗具有相同的氨基酸一級結構,但聚糖中不含有α-Gal,且末端唾液酸主要是人體常見的唾液酸化形式N乙酰神經(jīng)氨酸(NANA)。這與我們在臨床研究中觀察到較好的耐受性,未觀察到藥物相關性超敏反應相一致。在免疫原性大大降低的同時,CMAB009單抗在體內的清除特征符合嵌合抗體在

5、體內的代謝規(guī)律,其藥代動力學參數(shù)與Erbitux(R)基本一致。同時,本研究還深入探索分析不同的糖基化結構對治療性抗體安全性,藥代動力學及生物學活性的影響,進一步揭示了FcRn作為單抗消除旁路途徑所發(fā)揮的作用。
　　本研究證明,通過改造單抗的糖基化結構,在不影響單抗生物活性和清除特征的同時,可有效降低單抗的免疫原性,避免超敏反應的發(fā)生,減少臨床不良反應的發(fā)生率,有望為潛在的超敏反應患者帶來最大的益處,是一種潛在的安全可耐受的有效靶