抗纖軟肝顆粒對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞核仁非組蛋白的影響.pdf

1、目的：
　　 從蛋白質(zhì)的調(diào)控水平研究抗纖軟肝顆粒(KXRG)對(duì)肝星狀細(xì)胞(HSC)增殖的調(diào)控機(jī)制，進(jìn)一步探討KXRG抗肝纖維化的作用機(jī)制，從而進(jìn)一步闡明中藥抗肝纖維化的藥理學(xué)機(jī)制和作用靶點(diǎn)，為研制新型抗肝纖維化藥物提供理論基礎(chǔ)。
　　 方法：
　　 采用活化的肝星狀細(xì)胞系(HSC-T6)培養(yǎng)傳代，然后分別加入中藥KXRG(1.25mg/m1、2.5mg/m1、5mg/m1)及其大鼠含藥血清(5％、10％、20％)

2、進(jìn)行培養(yǎng)，并設(shè)空白對(duì)照組。72小時(shí)后，各組取部分細(xì)胞用流式細(xì)胞儀檢測HSC各周期DNA含量，并用電子顯微鏡觀察其超微結(jié)構(gòu)變化，研究KXRG對(duì)HSC細(xì)胞周期的影響；同時(shí)，另部分細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞核蛋白提取，利用免疫蛋白印跡法(Western blot)觀察用藥后HSC核仁非組蛋白(B23、C23)活性水平的變化，探討KXRG在蛋白質(zhì)表達(dá)水平對(duì)活化HSC的調(diào)控作用。
　　 結(jié)果：
　　 1.KXRG及其含藥血清對(duì)活化的HSC增殖的

3、影響 MTT的結(jié)果顯示KXRG及其含藥血清各濃度組均能抑制活化的HSC增殖，且含藥血清組明顯優(yōu)于藥物組(P＜0.01)；各藥物組及含藥血清組均優(yōu)于其對(duì)照組(P＜0.01，P＜0.05)，且2.5mg/m1藥物組分別與1.25mg/m1、5mg/ml藥物組比較有差異(P＜0.01，P＜0.05)；10％含藥血清組分別與5％、20％含藥血清組比較有明顯差異(P＜0.01)。
　　 2.KXRG及其含藥血清對(duì)活化的HSC細(xì)胞周期的影響

4、應(yīng)用流式細(xì)胞儀測得各組細(xì)胞在不同細(xì)胞周期的DNA含量，結(jié)果顯示不同濃度含藥血清組及藥物組作用于細(xì)胞72h后，隨濃度的增加G0/G1期細(xì)胞含量逐漸增加，均與對(duì)照組比較有差異(P＜0.05，P＜0.01)，而S期和G2/M期細(xì)胞含量則逐漸減少。表明KXRG能阻止細(xì)胞由G0/G1期進(jìn)入S期，但對(duì)于G2/M期影響不大，從而說明KXRG主要作用于G1/S關(guān)卡，即細(xì)胞周期限制點(diǎn)，而對(duì)M期的限制點(diǎn)無作用。
　　 3.KXRG及其含藥血清對(duì)活化

5、的HSC超微結(jié)構(gòu)的影響電鏡下正常HSC細(xì)胞胞膜完整，胞質(zhì)細(xì)胞器結(jié)構(gòu)清晰，核膜完整，核仁清晰，染色質(zhì)均勻分布于胞核中；經(jīng)KXRG預(yù)處理后，細(xì)胞體積縮小，胞膜表面凹凸不平，細(xì)胞質(zhì)電子密度加深，細(xì)胞核收縮，核仁松散，并逐漸分散到細(xì)胞核膜周圍，并可見細(xì)胞內(nèi)空泡形成。
　　 4.KXRG及其含藥血清對(duì)核仁非組蛋白B23、C23活性水平的影響Western blot的結(jié)果顯示KXRG可降低HSC核仁中B23、C23蛋白活性的表達(dá)，且隨藥物及

6、含藥血清濃度的增加而降低。
　　 結(jié)論：
　　 1、KXRG可以抑制活化的HSC增殖；阻滯其細(xì)胞周期的正常進(jìn)行，使其滯留于G0/G1期；并對(duì)其超微結(jié)構(gòu)有明顯影響。
　　 2、KXRG能降低HSC核仁非組蛋白B23、C23活性水平的表達(dá)。
　　 3、本研究結(jié)果提示：KXRG可能通過降低HSC核仁非組蛋白B23、C23活性水平的表達(dá)，調(diào)控細(xì)胞周期，抑制活化HSC的增殖，從而達(dá)到抗肝纖維化的作用，這可能是KXR