人及小鼠味蕾細(xì)胞的培養(yǎng)研究.pdf

1、背景:味覺(jué)是由外部刺激作用口腔內(nèi)的味蕾所引起的感覺(jué),是人及動(dòng)物感知外界刺激的一種重要方式之一。味覺(jué)在維持體內(nèi)能量平衡和內(nèi)穩(wěn)態(tài)平衡中起重要作用。在臨床上有一些疾病(如舌癌)及疾病治療方案(如頭頸部腫瘤放療)可引起患者出現(xiàn)味覺(jué)障礙,甚至味覺(jué)喪失。
　　目前味覺(jué)的研究相比于視覺(jué)、聽(tīng)覺(jué)和嗅覺(jué)的研究嚴(yán)重滯后,對(duì)于臨床中存在的味覺(jué)異常無(wú)法及時(shí)干預(yù)和治療。如果能夠從體外培養(yǎng)的味蕾細(xì)胞進(jìn)行探索,將會(huì)極大地加速味覺(jué)的研究。目前很少有成功培養(yǎng)出味蕾細(xì)

2、胞的報(bào)道,因此,建立人及ICR小鼠的味蕾細(xì)胞體外培養(yǎng)方法是非常必要的。
　　目的:建立一種穩(wěn)定良好的人及ICR小鼠味蕾細(xì)胞培養(yǎng)方法。
　　方法:
　　1.利用HE染色和免疫組織化學(xué)方法確定舌背粘膜上味蕾的存在部位。
　　2.取臨床舌腫物手術(shù)擴(kuò)大切除的正常味覺(jué)乳頭及ICR小鼠味覺(jué)乳頭組織,利用組織塊培養(yǎng)法和酶消化獲得味蕾細(xì)胞法進(jìn)行味蕾細(xì)胞的培養(yǎng)。
　　3.以味蕾細(xì)胞特異性蛋白對(duì)培養(yǎng)出的細(xì)胞進(jìn)行免疫學(xué)鑒定。

3、r>　　結(jié)果:
　　1.舌背粘膜HE染色發(fā)現(xiàn),菌狀乳頭、葉狀乳頭、輪廓乳頭含有味蕾,絲狀乳頭不含味蕾。
　　2.舌背粘膜α-gustducin免疫組織化學(xué)和免疫熒光顯示味蕾中約有20％~30%的細(xì)胞胞質(zhì)被標(biāo)記;在CK8免疫組化和免疫熒光顯示味蕾中的細(xì)胞胞質(zhì)均被標(biāo)記。
　　3.組織塊培養(yǎng)法和酶消化法均能從舌背味覺(jué)乳頭中獲得味蕾細(xì)胞,并能在體外培養(yǎng)味蕾細(xì)胞15d-18d。
　　4.體外培養(yǎng)的味蕾細(xì)胞在失去神經(jīng)支配后能